Electroforesis

Electroforesis:
Movimiento de macromoléculas disueltas en un medio (solución tampón de electroforesis) a través de un soporte reticulado, como resultado de la acción de un campo eléctrico.
Laactividad electroforética esta dada por la carga, tamaño y forma de la molécula. Las redes de polímeros actúan como tamiz retardando y bloqueando los polímetros más grandes. Se separa de dos formas:Relación carga/tamaño. Y tamizado que separa por tamaño. Más comunes Agarosa y poliacrilamida.
En un campo eléctrico las cargas negativas (aniones) van hacia el ánodo (polo positivo), las positivas(cationes) van hacia el cátodo (polo negativo).
Fricción: el solvente dificulta el movimiento de los solutos.
Difusión: Movimiento cinético de las partículas ley de Fick con el aumento de la temperaturamayor difusión.
La fricción depende de la masa y la forma de la molécula en adición a su carga eléctrica. Iniciador TEMD catalizador ión Persulfato. Para la polimerización de la acrilamida se sacael oxígeno.
Electroforesis en condiciones desnaturalizante: Proteínas se desnaturaliza por calor y B-mercaptoetanol (se pierde la estructura terciaria) las proteínas se separarían por su carga otamaño. El SDS une las cadenas 1,4 dos a.a. de la cadena quedando con carga negativa. Se separan acuerdo a su peso molecular.
Electroforesis Nativa: Se separan según su tamaño, forma y carga, la cualdepende del pH utilizado. Concentra mejor las bandas.
Electroforesis bidimensional: Primero se separa por isoelectroenfoque por su punto isoeléctrico y luego se separa por electroforesis enpoliacrilamida y SDS.

Electroforesis en geles de agarosa: Separación ácidos nucleicos. Resiste temperaturas sobre 50ª y separa moléculas grandes 20.000 nucleótidos.

Cromatografía en columna.
Faseestacionaria sólido poroso que esta en una columna. Fase móvil una solución que atraviesa la fase estacionaria. La resolución aumenta con la longitud de la columna. El tiempo disminuye la resolución por...