Electroforesis

Universidad Autónoma de Yucatán
Facultad de Odontología

Bioquímica

AFUNDAMENTOS DE LA ELECTROFORESIS PROTEÍCA

DR. Eugenia Guzmán Marín
Fecha de entrega:
Lunes 08 de noviembre de 2010

Br. Karen Ábrego Chávez
Br. Adriana Ámbar Balam Galván
Br. Thelmy Solís Marín
Br. William Darío Negrón Domínguez
Br. Eduardo Javier Koyoc Mis
Br. Alfredo Escamilla Priego

INTRODUCCIÓNDebido a que la información genética se expresa a través de las proteínas, no es sorprendente que se haya dedicado un tiempo, esfuerzo y dinero a investigar sus propiedades. Desde la determinación de la secuencia de la insulina de bovino por Frederick Sanger en 1953, se han elucidado las estructuras de varios miles de proteínas. Además de proporcionar conocimientos sobre los mecanismos molecularesde varias proteínas, la información sobre la estructura proteica ha conducido a un entendimiento más profundo de las relaciones evolutivas entre las especies. Debido a que algunas enfermedades hereditarias se conoce la actualidad que están producidas por alteraciones de la secuencia de aminoácidos de proteínas específicas, se han diseñado nuevas pruebas diagnosticas y tratamientos clínicos.
Latecnología que se utiliza para determinar la estructura proteica he cambiado de forma significativa desde los años 1950. Por ejemplo, la determinación de la estructura de la insulina requirió los esfuerzos de muchos científicos durante 10 años. Actualmente, un equipo de trabajo bien financiado puede determinar la estructura proteica recién descubierta en menos de un año. Gran parte del tiempose dedica diseñar métodos eficaces para la extracción y purificación de la proteína. Debido a la tecnología automática, la determinación de la secuencia de aminoácidos puede requerir sólo unos pocos días de trabajo. Una parte sustancial del tiempo del investigador se dedica a la extracción y purificación de las proteínas debido a varios problemas formidables.

Los más notables son:
1. Lascélulas contienen miles de sustancias diferentes. Con pocas excepciones (p. ej.; la hemoglobina de los eritrocitos), la proteína que interesa se encuentra en cantidades pequeñas. Separar una proteína específica a partir de un extracto celular en cantidades suficientes son fines investigadores suele representar un desafío a la resistencia e ingenuidad del investigador.
2. Las proteínas suelen serinestables y pueden requerir una manipulación especial. Por ejemplo, puede ser especialmente sensible al pH, la temperatura o la concentración salina, entre otros factores. Los problemas en la manipulación salina, entre otros factores. Los problemas en la manipulación de una proteína pueden ponerse en manifiesto sólo después de haber gastado un tiempo y esfuerzo considerables. Por ejemplo, lainvestigación de la nitrogenasa, la enzima que cataliza la reducción del N2 para formar NH3, fue obstaculizada durante años hasta que se descubrió que la actividad enzimática se destruía en contacto con el O2.
Las técnicas para el aislamiento, la purificación y la caracterización inicial de las proteínas que se esbozan posteriormente, explotan las diferencias de carga, peso molecular y afinidades deunión. Muchas de estas técnicas se aplican a la investigación de otras biomoléculas.

FUENTE: Bioquímica LA BASE MOLECULAR DE LA VIDA, tercera edición; Trudy McKee, James R. McKee. McGRAW-HILL INTERAMERICANA. Pag.152-156 “métodos bioquímicos, tecnología proteica”
ANTECEDENTES
Tecnología proteica
Técnicas de aislamiento
El primer paso en cualquier proyecto es poner a punto un análisis dela proteína que interesa. Debido a que la proteína suele extraerse de fuentes que contienen cientos de moléculas semejantes, el análisis debe de ser específico. Además el análisis debe de ser fácil de realizar, ya que se va utilizar con frecuencia durante la investigación. Si la proteína es una enzima, puede medirse la desaparición del sustrato reactante) o la formación del producto. Las...