Electroforesis

Análisis de la Presencia de Organismos Genéticamente Modificados en Muestras de Alimentos

Sesión nº 5 Electroforesis en gel de agarosa

M. Somma, M. Querci

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Índice Sesión nº 5 Electroforesis en Gel de Agarosa

Introducción Principios físicos de la electroforesis en gel de agarosa Componentes de la electroforesis en gel de agarosa Práctica Bibliografía

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Análisis de la Presencia de Organismos Genéticamente Modificados en Muestras de Alimentos

Sesión nº 5

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Introducción
La electroforesis en gel es un método que se emplea para separar macromoléculas en función del tamaño, la carga eléctrica y otras propiedades físicas. El término electroforesis describe la migración de las partículas cargadas bajo la influencia de un campo eléctrico. «Electro» se refiere a la electricidad y «foresis», del griego phoros, significa «trasladar». Así pues, laelectroforesis en gel es una técnica consistente en aplicar corriente eléctrica a las moléculas para que atraviesen una placa de gel. La fuerza motriz de la electroforesis es la tensión eléctrica aplicada a los electrodos en ambos extremos del gel. un medio gelatinoso. Muchas macromoléculas biológicas importantes (por ejemplo, los aminoácidos, los péptidos, las proteínas, los nucleótidos y los ácidosnucleicos) poseen grupos ionizables y, a un pH determinado, existen en solución como especies cargadas eléctricamente, sean cationes (+) o aniones (-). Según la naturaleza de la carga neta, las partículas cargadas migrarán hacia el cátodo o hacia el ánodo. Así, por ejemplo, cuando se aplica un campo eléctrico a un gel con pH neutro, los grupos fosfato del ADN cargados negativamente lo haránmigrar hacia el ánodo (Westermeier, 1997). La electroforesis en gel de agarosa es un método normalizado que se utiliza para separar, identificar y purificar fragmentos de ADN. Se trata de una técnica sencilla y rápida que permite diferenciar fragmentos de ADN que no pueden separarse adecuadamente con otros procedimientos. Por otra parte, el ADN puede localizarse en el gel tiñendo con una concentraciónbaja de bromuro de etidio, que es un agente intercalante fluorescente que se utiliza como colorante. En las siguientes secciones se presentan los principios físicos, los componentes (matriz de gel, tampón, tampón de carga y marcador) y los procedimientos para preparar la electroforesis en gel de agarosa (Sambrook et al., 1989). Las propiedades de una molécula determinan la velocidad con que uncampo eléctrico puede desplazarla a través de

Principios físicos de la electroforesis en gel de agarosa
La electroforesis en gel es una técnica que se emplea para separar los ácidos nucleicos y las proteínas. La separación de las macromoléculas depende de dos variables: carga y masa. Cuando una muestra biológica, como por ejemplo el ADN, se mezcla en una solución tampón y se aplica a un gel, esasdos variables actúan conjuntamente. La corriente eléctrica de un electrodo repele las moléculas, al

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tiempo que el otro electrodo las atrae. La fuerza de fricción del material de gel actúa como «tamiz molecular», separando las moléculas en funciónde su tamaño. Durante la electroforesis, las macromoléculas son empujadas a través de los poros, dependiendo su tasa de migración por el campo eléctrico de los siguientes factores: • fuerza del campo • tamaño y forma de las moléculas • hidrofobicidad relativa de las muestras • fuerza iónica y temperatura del tampón en que se desplazan las moléculas. Para tener una idea cabal del proceso de...