Electroforesis
Páginas: 2 (457 palabras)
Publicado: 4 de junio de 2012
Para estimar la cantidad de proteínas de virus /UFP (es decir, virus total/infectivo) es de 50/1, pero dependiendo del tipo de virus puede llegar incluso a 1000/1.
Para estimar la cantidad deproteínas se han utilizado varios métodos basados, por ejemplo, en la medida de nitrógeno total (Kjeldahl), medida de la cantidad de triptófano, fenilalaninay tiroxina por la absorción en el ultraviolera(absorción a 280 nm), medida de enlace peptidico por la absorción en el ultravioleta (absorción a 230 nm, absorción a 215-225 nm) y producción de color visible (Folin, Biuret, Badford).
El métodoque se debe utilizar depende del que sea mas sencillo en cada caso particular. Así en ausencia de ácidos nucleídos (máximo de absocion a 260 nm), se puede estimar la concentración de proteína porabsorbancia, que además es un método no destructivo, inestimable. Si la concentración es alta, se puede medir a 280 nm; aunque la relación entre absorbancia y concentración depende de la abundancia deaminoácidos aromáticos en cada proteína particular, generalmente se puede medir la absorbancia sin necesidad de diluir la muestra.
Si la concentración es muy baja, puede utilizarse la absorbancia sonnecesidad de diluir la muestra. En presencia de ácidos nucleídos se debe utilizar un método colorimétrico debido a que la interfieren con la absorbancia en muy alta. El mas simple es el Bradford. Enpresencia de agentes que unterfieren con algunos de los métodos mencionados con anterioridad (por ejemplo, SDS para el Bradford, mertiolato para la A280 nm,etc.) es necesario emplear un métodoalternativo. Ahora bien, debido a que muy amenudo solo se necesita una estimada aproximada, el método Bradford y la absorción a 280 nm suelen ser suficientes. Una mayor aproximación puede lograrse después dela tinción con azul de Coomassie de las proteínas separadas por electroforesis en geles de poliacrilamida y comparación con la tinción de proteínas de concentración conocida.
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Para estimar la cantidad deproteínas se han utilizado varios métodos basados, por ejemplo, en la medida de nitrógeno total (Kjeldahl), medida de la cantidad de triptófano, fenilalaninay tiroxina por la absorción en el ultraviolera(absorción a 280 nm), medida de enlace peptidico por la absorción en el ultravioleta (absorción a 230 nm, absorción a 215-225 nm) y producción de color visible (Folin, Biuret, Badford).
El métodoque se debe utilizar depende del que sea mas sencillo en cada caso particular. Así en ausencia de ácidos nucleídos (máximo de absocion a 260 nm), se puede estimar la concentración de proteína porabsorbancia, que además es un método no destructivo, inestimable. Si la concentración es alta, se puede medir a 280 nm; aunque la relación entre absorbancia y concentración depende de la abundancia deaminoácidos aromáticos en cada proteína particular, generalmente se puede medir la absorbancia sin necesidad de diluir la muestra.
Si la concentración es muy baja, puede utilizarse la absorbancia sonnecesidad de diluir la muestra. En presencia de ácidos nucleídos se debe utilizar un método colorimétrico debido a que la interfieren con la absorbancia en muy alta. El mas simple es el Bradford. Enpresencia de agentes que unterfieren con algunos de los métodos mencionados con anterioridad (por ejemplo, SDS para el Bradford, mertiolato para la A280 nm,etc.) es necesario emplear un métodoalternativo. Ahora bien, debido a que muy amenudo solo se necesita una estimada aproximada, el método Bradford y la absorción a 280 nm suelen ser suficientes. Una mayor aproximación puede lograrse después dela tinción con azul de Coomassie de las proteínas separadas por electroforesis en geles de poliacrilamida y comparación con la tinción de proteínas de concentración conocida.
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