electroforesis

LA ELECTROFORESIS

Índice

Definición
¿Para qué sirve?
Tipos
Funcionamiento
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Definición
La electroforesis es un método de laboratorio en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada con la finalidad de separar biomoléculas según su tamaño y carga eléctrica a través de un sólido, una matriz porosa, o bien, en disolución, es decir, la migración departículas cargadas eléctricamente, disueltas o suspendidas en un electrolito a través del cual se pasa una corriente eléctrica. Estas moléculas luego son teñidas para poder ser localizadas. Está basada también en la velocidad que será diferente dependiendo del tamaño.
Esta técnica de separación fue introducida por el químico sueco Arne Tiselius. El interés principal de este investigador fue laquímica de las proteínas séricas. Por su trabajo pionero en este campo, recibió en 1948 el Premio Nobel.

¿Para qué sirve?
La principal aplicación es la caracterización y análisis cuantitativo de moléculas biológicas, principalmente, proteínas, aminoácidos, péptidos y ácidos nucleicos. Y otras sustancias bioquímicas como insulina, histonas, lipoproteínas, enzimas…
La técnica de electroforesismás común para el análisis de mezclas de proteínas o de ácidos nucleicos utiliza como soporte un gel, habitualmente de agarosa o de poliacrilamida. Los ácidos nucleicos ya disponen de una carga eléctrica negativa, que los dirigirá al polo positivo, mientras que las proteínas se cargan al unirse con sustancias como el SDS (detergente), que incorpora cargas negativas de una manera dependiente de lamasa molecular de la proteína, o a un agente reductor como 2-mercaptoetanol. Los geles de poliacrilamida en electroforesis se suelen utilizar en la separación de moléculas circulares y lineales de DNA.
En la separación de sustancias de bajo peso molecular como aminoácidos y péptidos se emplea la técnica de la electroforesis en papel. Es muy útil en los laboratorios químicos por su fácilmanipulación y su rápido desarrollo.
Y estos análisis cuantitativos pueden derivar en otras aplicaciones como por ejemplo el caso del análisis del ADN y las investigaciones forenses. El ADN se organiza en secuencias específicas, por ejemplo, una secuencia representa el color de tus ojos y otra secuencia representa el color de tu piel. Mediante electroforesis, las secuencias específicas de ADN pueden seranalizadas, aisladas y clonadas. El ADN analizado se puede utilizar en investigaciones forenses y pruebas de paternidad.
Otra aplicación derivada en este caso del análisis cuantitativo de las proteínas es el estudio de las enfermedades, obteniendo muestras de sangre y orina para luego, a través de la electroforesis, medir la cantidad de proteínas en la sangre o en la orina se mide y compararcon los valores normales establecidos. Si son inferiores o superiores a los niveles normales por lo general indican una enfermedad.
Otras aplicaciones son los análisis de antibióticos, de vacunas…
Tipos
Electroforesis libre: es aquella en la cual las partículas se mueven libremente en el medio en el que se encuentran dispersas.
La muestra o sustancias a separar se introducen en un tubo en formade U el cual está rellenado de una disolución tampón con pH y fuerza iónica adecuadas. En este tipo de electroforesis no existe sistema de soporte o medio de estabilización. Entonces se colocan los electrodos entre los cuales se crea un campo eléctrico que provoca la migración de las moléculas de la muestra que pueden ser por ejemplo proteínas, hacia los electrodos de polaridad opuesta.Electroforesis de zona: En este tipo de electroforesis sí que existe sistema de soporte sobre el cual se sitúa la muestra físicamente en forma de mancha o de banda. Se suele utilizar para determinar la pureza de una muestra, para detectar cambios de conformación o de movilidad de las sustancias… El sistema de soporte puede ser un papel o un gel, de aquí los dos tipos que hay:
Electroforesis en papel:...