Electroforesis

ELECTROFORESIS
Para realizar la electroforesis hay que seguir varias pautas, detalladas a
continuación:
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Preparación del gel de almidón. Utilizamos almidón procesado
comercialmente,preparamos el tampón y lo mezclamos con el
almidón (en una relación 1 de almidón:10 de tampón). Se bate la
mezcla y llevamos a hervir, observando cómo densifica la muestra.
Alcanzado este momento, se apartadel fuego, se desgasifica para
evitar el ralentizamiento del avance de las isoenzimas y se vierte en
un molde, dejándolo solidificar unas cuantas horas.



Selección de las hojas de lentejascomo material vegetal.
Seleccionamos solamente las hojas para evitar problemas de mezcla
de bandas de distinto origen tisular.

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Introducción del material vegetal seleccionado en el gel dealmidón – Obtención e inserción de las proteínas. Una vez
transcurrido el tiempo de solidificación, se procede al corte del gel y
el material vegetal se maceró individualmente (proceso individual,planta a planta), produciéndose la extracción de las proteínas que
quedarán empapadas en el papel Whatman 3. Estos papeles se
colocaron de una forma equidistante entre sí. Cada 10 – 11 muestras
sedebe colocar una muestra control de bandas conocidas. Una vez
introducidos todos los papeles Whatman, se marca el frente con azul
de bromofenol (éste migrará más rápido que cualquier proteína) y secolocan todos los elementos del molde para alcanzar el mayor
contacto posible entre el gel y las muestras. Como este proceso
requiere una temperatura baja (se hace sobre hielo) para evitar ladesnaturalización de las proteínas, el molde se introduce en una
cámara de electroforesis. Transcurrido un periodo de 1 hora, retiro
los papeles para que después las bandas sean visibles y no queden“manchones”.
Pasadas seis horas de espera, se procede al corte del gel en lonchas
de pocos milímetros para, posteriormente, poder observar bien las
bandas.

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Reacción y tinción. Al finalizar la...