ELECTROFORESIS


ELECTROFORESIS

CONTENIDO.

INTRODUCCION

TIPOS DE GELES UTILIZADOS COMO MEDIOS DE SOPORTE

FACTORES QUE AFECTAN LA MOVILIDAD DE LOS ACIDOS NUCLEICOS EN GELES DE AGAROSA.

EQUIPOS UTILIZADOS EN ELECTROFORESIS DE AGAROSA.

PREPARACION DE GELES DE AGAROSA.

GELES DE POLIACRILAMIDA (PAGE).

TIPOS DE GELES DE POLIACRILAMIDA.
DESNATURALIZANTES
NO DESNATURALIZANTESGUIA DE AUTOEVALUACION DE LA PRACTICA DE ELECTROFORESIS.

AL FINALIZAR LA SIGUIENTE PRACTICA, EL ESTUDIANTE DEBE ESTAR EN CAPACIDAD DE.

CONOCER LOS PRINCIPIOS BASICOS DE LA ELECTROFORESIS

CONOCER LOS DIFERENTES MEDIOS DE SOPORTE UTILIZADOS EN LA ELECTROFORESIS.


DETERMINAR LOS FACTORES QUE AFECTAN UNA CORRIDA DE ELECTROFORESIS.


REALIZAR UNA ELECTROFORESIS ENAGAROSA COMO METODO DE IDENTIFICACION DEL ACIDO NUCLEICO VIRAL

MANEJAR CORRECTAMENTE EL EQUIPO DE ELECTROFORESIS EN AGAROSA.

















ELECTROFORESIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS

INTRODUCCIÓN:

El término electroforesis es generalmente aplicado al movimiento de iones pequeños y macromoléculas cargadas en solución bajo la influencia de un campo eléctrico. El rango demigración depende del tamaño y movimiento de las moléculas. Esta migración es gobernada por un conjunto de factores, siendo los mas importantes la carga, tamaño y forma de las partículas, la concentración, fuerza iónica, pH del solvente, temperatura viscosidad del medio carácter e intensidad del campo eléctrico.
Existen diferentes medios de soportes para realizar la electroforesis, los másutilizados son: el papel, el acetato de celulosa, silica gel y los geles de agarosa o poliacrilamida (PAGE) son métodos estándar para separar, purificar o identificar fragmentos de ácidos nucleicos. La técnica es simple y relativamente rápida, capaz de separar fragmentos de ácidos nucleicos que no pueden ser separadas por otros métodos tales como centrifugación en gradiente de densidad.

Lalocalización del ácido nucleico dentro del gel puede detectarse directamente con colorantes fluorescentes a bajas concentraciones tales como el Bromuro de Etidio.
La electroforesis en agarosa y PAGE pueden realizarse en una amplia variedad de formas, tamaños y porosidad. La selección dentro de estos parámetros depende inicialmente del tamaño de los segmentos a ser separados. Por ejemplo, el Page es másefectivo para separar fragmentos de DNA de 5 - 500 pb, su poder de resolución es muy elevado, y fragmentos de DNA que difieren en un par de bases pueden separarse el uno del otro. Tienen la desventaja de que resultan más difíciles de preparar que los geles de agarosa.
Los geles de agarosa tienen un poder de resolución más bajo, ellos pueden ser corridos de forma horizontal y en un campo eléctricocon dirección y voltaje constante.
Fragmentos largos de agarosa tiene un poder de resolución más bajo, ellos pueden ser corridos de forma horizontal y en un campo eléctrico con dirección y voltaje constante.



TIPOS DE GELES:

1. GELES DE AGAROSA:

La agarosa, la cual es extraída de algas marinas, es un polímero linealde galactosa. La agarosa que se encuentra disponible comercialmente noes completamente pura, generalmente se encuentra contaminada con otros polisacáridos, sales y proteínas. La cantidad de contaminantes varía dependiendo de las casas comerciales que las fabrican.
Estas diferencias pueden afectar tanto la migración del DNA como la capacidad de recuperación del DNA del gel y servir como sustrato en diferentes reacciones enzimáticas.
Debido a la gran demanda de laagarosa en los últimos diez años, muchas empresas se han dedicado a elaborar la agarosa con diferentes grados de pureza, las cuales son probadas para determinar la presencia de inhibidores y nucleasas, y evitar el “background” que se produce cuando se colorea con bromuro de etidio.
Este tipo de agarosa es utilizada con frecuencia para electroforesis de DNA y para la digestión del DNA con...