Electroforesis

ELECTROFORESIS

 
Fundamentos:

La electroforesis es una técnica separativa basada en la migración diferencial que experimentan partículas cargadas eléctricamente al estar bajo la influencia de un campo eléctrico.
Éstas cargas, manifiestan un fenómeno de atracción o repulsión, desplazándose hacia el polo opuesto. Asi, las particulas cargadas positivamente migrarán hacia el cátodo, donde seencuentran las cargas negativas, y aquellas cargadas negativamente lo harán hacia el ánodo. Ésto ocurre debido al fenómeno eléctrico.
Al estar sometidas a un campo eléctrico homogéneo, la fuerza eléctrica les impone una aceleración inicial a las partículas, por lo cual comienzan a moverse.
En la electroforesis, al estar inmersas en un fluído, las partículas sufren una fuerza en sentido opuesta ala fuerza eléctrica, la fuerza de rozamiento.
Cuando la fuerza eléctrica y de rozamiento se igualan, están en equilibrio, y al tener sentidos opuestos, la sumatoria de fuerzas que actúan sobre la partícula es cero, quedando sin influencia de aceleración y siendo esa la velocidad máxima que alcanza. Como ésta se alcanza rápidamente, es válido decir que siempre corre a velocidad constante.
Lamigración de una partícula depende de la velocidad que alcance en un determinado fluído. Esta velocidad, se ve afectada por las características de la partícula, la viscosidad del medio y de la intensidad del campo eléctrico aplicado.
Bajo iguales condiciones de corrida, partículas que difieran en carga, tamaño y/o forma migrarán a distinta velocidad, y por ende recorrerán distinta distancia duranteun mismo período de tiempo.
El movimiento depende a su vez de diversos factores como ser:

* Fuerza iónica:

Estima la actividad de los electrolitos en solución según su carga y concentración, considerándose que una alta carga iónica corresponde a una concentración elevada de electrolitos.
La presencia de electrolitos tiende a contrarrestar la migración de la partícula debido a su movimientoopuesto. La esfera de solvatación que se forma se relaciona directamente con la velocidad de movimiento, ya que si es mayor, indica una elevada concentración de elctrolitos, y por lo tanto disminuye la velocidad.

* PH:

Las moléculas biológicas que se utilizan en electroforesis, se ionizan parcialmente en solución, quedando en equilibrio distintas especies, ácidas y básicas. El pH puedemodificar las cargas de las especies. En condiciones muy extremas de pH, las especies estarán totalmente ionizadas presentando cargas.

* Temperatura:

La viscosidad del buffer depende de la temperatura, por lo tanto el coeficiente de fricción también, asi como el fenómeno de difusión determinado por la cinética molecular y la evaporación del buffer.
En el trabajo práctico, utilizamos lasvariables temperatura, pH, fuerza iónica y viscosidad constantes, por lo que en vez de analizar la velocidad, analizamos la movilidad electroforética.
La movilidad electroforética nos permite identificar sustancias, debido a que es una constante física si se mantiene constante el medio y la temperatura, aunque se encuentra en estrecha relación con las condiciones de trabajo seleccionadas.
Por esemotivo, su cálculo se puede hacer en relación a las variables experimentales que se controlan en la corrida electroforética.
U = d . L / V . t
Como expresamos previamente, la movilidad elctroforética es independiente de las condiciones experimentales ya que si variaría alguna de ellas, se modificará la distancia recorrida pero no la movilidad, la cual es constante, dado a que es una característicapropia de la sustancia en un determinado medio.


Se debe utilizar un equipo apropiado para la realización de la corrida, el cual cuenta con:

- Cuba electroforética: Tiene dos reservorios de buffer, uno anódico y otro catódico, cada uno con un electrodo sumergido, los cuales a través de cables están conectados a una fuente de poder.

- Soporte: Se encuentra ubicado dentro de la cuba, en el...