Electroforesis

 UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN
MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

PRACTICA 5. SEPARACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE PROTEINAS LÁCTEAS POR ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA-SDS (SDS-PAGE)

Equipo 6:
López Cruz Cynthia Leticia
Ortiz Valdés Ricardo Armin
Rangel Romo Brenda Ximena
Reyes Alegría David AlejandroTorres Cid Omar Rodrigo

Profesores:
MVZ María del Carmen Barrón García
MVZ Ranulfo Reyes Gama
MVZ Silvia Leticia Bonilla Orozco

Grupo: 1153
4 de octubre del 2012

Resumen.
En esta práctica se realizó un método de separación de proteínas llamado electroforesis, el cual consiste en aplicar una carga eléctrica sobre una solución que contenga una proteína, debido a que las proteínas poseenuna carga determinada por los aminoácidos que la conforman, dependiendo de la carga que posean esta migrara hacia el electrodo que aplica esta carga eléctrica.
Para este experimento se elaboraron un par de geles de poliacrilamida, cada uno con distinta porosidad y pH, el gel separador como su nombre lo indica va a separar las proteínas de la muestra y el otro gel llamado compactador oconcentrador va encima del anterior y sirve para concentrar las proteínas de la muestra, este gel tiene un pH menor que el gel anterior.
Estos geles son colocados entre dos placas de vidrio, colocando un pequeño peine entra las placas con el fin de formar los pozos en donde serán agregadas las muestras, sin separar las placas de vidrio colocamos el gel en la cámara de electroforesis en donde agregamos elamortiguador de corrimiento.
En los pequeños pozos que se formaron se agregaron las muestras, pero no se usaron ni el primer ni el ultimo carril pues puede alterar el corrimiento de las proteínas, en el segundo carril se agregaron 10µl de marcador de peso molecular que es una solución de albumina de suero bovino y 20µl de muestra en los carriles restantes, luego cerramos la cámara de electroforesisy se conecto y encendió a 120v. aproximadamente durante 2 horas.
Una vez que termino el proceso de electroforesis desconectamos el dispositivo y con una espátula separamos cuidadosamente el gel de las placas de vidrio, luego se coloco en un recipiente con una solución de azul de Coomassie para su tinción, ya teñido se coloca en un agitador orbital, luego se destiñe con solución desteñidora y sevuelve a colocar en el agitador con esta solución.
Al día siguiente se pueden observar cómo se desplazaron las proteínas, con base al marcador de peso molecular podemos calcular el peso molecular de las proteínas que observamos, primero medimos la distancia que recorrió la albúmina del suero bovino, (4.2cm) este equivale a 69000 Daltons, luego medimos la distancia que recorrieron las proteínas ycon los datos que ya conocemos podemos obtener el peso molecular de las proteínas mediante una regla de tres.
Obteniendo ya los pesos moleculares podemos reconocer de que proteínas se trataban, aquellas proteínas con un menor peso molecular migraron o recorrieron una distancia menor a las proteínas con un peso molecular mayor.
Introducción.
La electroforesis es un método de separación deproteínas el cual consiste en la aplicación de un campo o una carga eléctrica en el medio donde se encuentre la proteina La separación puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte sólido (p. ej., electroforesis en papel), a través de una matriz porosa (electroforesis en gel), o en disolución (electroforesis libre). La electroforesis se usa en su mayoría en la materia del ADNrecombinante pues nos permite saber la carga que poseen los polipéptidos, y separar los diferentes polipéptidos resultantes de las variaciones del experimento del ADN recombinante. El uso más común para el análisis de mezclas de proteínas o de ácidos nucleicos utiliza como soporte un gel, habitualmente de agarosa o de poliacrilamida.
Los ácidos nucleicos tienen una carga eléctrica negativa, porque...