Electroforesis

27/10/2009

NATURALEZA DE LA REACCION Ag-Ab
La interacción Ag-Ab es una reacción de
complementaridad,
complementaridad, que se efectúa a través de

Reacciones de precipitación

múltiples enlaces no covalentes entre una parte del
enlaces
Ag (epitopo o determinante antigénico) y los aa del
sitio de unión en el Ab (paratopo).

El sitio de combinación de un Ab está localizado
en laporción Fab de la molécula y está formado de
las regiones hiper-variables de la cadena H y L.

Interacción Antígeno-Anticuerpo
Uniones no covalentes

• Naturaleza de la interacción
•
•
•
•

No covalente
Reversible
Específica
Rápida

Las uniones que mantienen unido al Ag en el sitio de
combinación del Ab son todas de naturaleza no covalente. Estos
incluyen:
• Puentes de Hidrógeno• Uniones electrostáticas
• Fuerzas de van Der Waals

• Podemos diferenciar 3 etapas
• Primaria
• Secundaria
• Terciaria

ENLACES NO COVALENTES

• Uniones Hidrofóbicas
Múltiples uniones entre el Ag y el Ab asegura que el Ag se una
fuertemente al Ab

• Primaria: Primer reconocimiento Ag-Ac
• No visible
• Rápida
• Poco influenciada por Tº, electrolitos

• Secundaria:Interacción de los complejos Ag-Ac
(consecuencias de la reacción)
• Visibles
• Influenciados por Tº, electrolitos,viscosidad

• Terciaria: Sólo ocurren in vivo
• Fenómenos biológicos (Reacción de Arthus, efectos
vasoactivos (alergias)

1

27/10/2009

Etapa primaria
• El Ag o el Ac se marcan covalentemente con
distintas sustancias
Radioactivas

Radioinmunoanalisis
Medición deradioactividad

Enzimas

Enzimoinmunoanalisis
Medición de color

fluorocromos

Etapa secundaria
La reacción Ag-ab ocurre en dos etapas:
primera etapa:
sucede la interaccción físico-química entre las moléculas
del Ag y del Ab
segunda etapa:
esta interacción se hace manifiesta por la formación de:
precipitado
Ag soluble Precipitación
Precipitación
aglutinado
Ag es particulado (gránulos depolen,
células o bacterias)
Aglutinación
Aglutinación
Ag particulado son GR hemaglutinación

Inmunofluorescencia
Medición de fluorescencia

Fijacion de complemento

neutralizaciòn

REACCIONES DE PRECIPITACION
La interacción entre un Ab bivalente y un Ag soluble
(multivalente) en solución acuosa forma un enrejado que poco
a poco se desarrolla hasta un precipitado visible.(Precipitado
blanquecino)

REACCIONES DE PRECIPITACION
EN MEDIOS LIQUIDOS : TUBO CAPILAR
EN MEDIOS SEMISOLIDOS:
INMUNODIFUSION DOBLE,

Los Ab que precipitan a los Ag solubles se llaman
precipitinas
precipitinas
Ag
Ag soluble precipitinógeno
La formación de complejos solubles se presenta a los
pocos minutos, la formación de un precipitado visible ocurre
más lentamente y con frecuencia toma 1o 2 días para
formarse completamente el precipitado.

Etapas de la precipitación
• El Ab debe ser bivalente;
• el precipitado no se forma con fragmentos Fab
monovalentes

• El Ag debe ser multivalente; esto es debe de tener al
menos dos copias del mismo epítopo o tener diferentes
epítopos que reaccionan con diferentes anticuerpos
presentes en un antisuero policlonal..

• Primeraetapa
– Es rápida, depende de la temperatura, y de
electrolitos, se forman complejos Ag-Ab primarios
y débiles.

• Etapa secundaria
– Es mas lenta, depende de la temperatura y es
electrolito dependiente, se ve influenciada por la
concentración de Ag y Ab.

2

27/10/2009

La formación del enrejado entre los complejos inmunes y, por lo tanto,
su precipitación, sólo se produce cuando lasconcentraciones de Ag y
Ab son equivalentes:

REACCIONES DE PRECIPITACION
1. Precipitación en medios líquidos
– Precipitación en tubo
capilar

prozona

2. precipitación en medios semisólidos

postzona

– Inmunodifusión simple

Zona de equivalencia

– Inmunodifusión doble: Ouchterlony
Complejos pequeños
Y solubles

– Inmunodifusión radial
– Inmunodifusión de cohete
–...