Electroforesis

ELECTROFORESIS
Una de las técnicas más sencillas para la separación (y posterior
cuantificación) de proteínas es la electroforesis (técnica en la cual una
partícula cargada se hace desplazar através de un medio aplicando un
campo eléctrico).
Cuando se aplica un campo eléctrico a un medio que contiene partículas
cargadas, las partículas cargadas negativamente migran hacia el ánodo opolo positivo mientras que, las cargadas positivamente migran hacia el
electrodo negativo (cátodo).
Este principio se puede aplicar para separar las fracciones de proteínas
puesto que losaminoácidos (aa) constituyentes de la proteínas, y por tanto
las proteínas, son compuestos anfóteros que se comportan como ácidos6
(ceden protones y quedan con carga negativa) o bases (captan protones yquedan con carga positiva) dependiendo del medio en el que estén.
NOTA: El pH al que un aa no se comporta ni como ácido ni como base se
denomina punto isoeléctrico pI (en él la estructura del aa noposee carga neta). Los pI varían desde 3 a 10, sin que exista
un pH al que todos los aa sean neutros.
· a pH superior 2 o + unidades a pI, el aa aparece cargado
negativamente
· a pH inferior 2o + unidades a pI el aminoácido aparece cargado
positivamente
· pH = pI los aa aparecen como iones dipolares neutros
En soluciones muy ácidas todos los aa aparecen como cationes,
mientras que ensoluciones muy básicas los aa se encuentran en
forma aniónica..
Si una disolución de proteínas se somete a la acción de un campo eléctrico
la tasa de migración durante la electroforesis dependede:
· La carga neta de la molécula, su forma y tamaño
· La fuerza del campo eléctrico
· Características del soporte
La cantidad de carga neta en la molécula es variable y depende del pH delamortiguador. Si el pH del medio es menor que el punto isoeléctrico, las
proteínas se comportan como cationes y, si el pH del medio es superior al
pI, se comportan como aniones. La carga de la...