Electroforesis

Electroforesis capilar
Electroforesis

LUIS ENRIQUE MENDOZA
LUIS

POSTGRADO EN INGENIERÍA BIOMÉDICA
POSTGRADO
UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
MÉRIDA VENEZUELA
NOVIEMBRE 2006

Electroforesis capilar
Electroforesis
AGENDA
RESUMEN
TIPOS DE ELECTROFORESIS
EQUIPO DE ELECTROFORESIS CAPILAR EN ZONA
SEPARACIÓN DE MUESTRAS
FENOMENOS DE DISPERSIÓN
ELECTROFEROGRAMA
VENTAJAS-DESVENTAJASElectroforesis capilar
Electroforesis
RESUMEN

El termino electroforesis se emplea para describir la
El
migración de partículas cargadas bajo la acción de un
migraci
de
campo eléctrico. La electroforesis constituye una
campo
ctrico.
técnica
de
separación
basada
diferentes
basada en
velocidades (movilidad) de un conjunto de solutos
(sustancia),
sometidos a la acción del campo(sustancia),
del
eléctrico.
el

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Electroforesis
TIPOS DE ELECTROFORESIS

Cromatografía electrocinética micelar (MEKC).
Cromatograf
Isotacoforesis.
Isotacoforesis.
Isoelectroenfoque.
Isoelectroenfoque.
Electroforesis capilar en gel (CGE).
Electroforesis
Electroforesis capilar en zona (CZE).
Electroforesis

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Electroforesis
COMPONENTESBÁSICOS EC.

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Electroforesis
CROMATOGRAFÍA ELECTROCINÉTICA MICELAR
TICA
(MEKC).
(MEKC).
la separación es basada en la afinidad de los analitos entre
es
micelas – tensioactivo (anionicos,cationicos) - electrolito.
tensioactivo

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Electroforesis
ISOTACOFORESIS.
Electroforesis igualvelocidad., la sustancia es ordenada según su
movilidad. Separa solo una sustancia
movilidad.

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Electroforesis
ISOELECTROENFOQUE.
La separación es basada en el punto
es
Isoelectrico de cada analito.
Isoelectrico
Especies anfóteras (glicina).

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Electroforesis
ELECTROFORESIS CAPILAR EN GEL
La separación es basada enel tamaño de las moléculas.
Polímeros (monómeros-molécula química sencilla).

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Electroforesis
ELECTROFORESIS CAPILAR EN ZONA
Separación en función carga/masa.
Separación de iones + y -.
de

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Electroforesis
POR QUE UTILIZAR ?

Una técnica de separación de sustancias basado en las
de
característicasde sus velocidades (movilidad) de un conjunto de
caracter sticas
solutos (sustancia), sometidos a la acción del campo eléctrico.
solutos
ctrico.
Requiere una cantidad de muestra relativamente pequeña.
Requiere
También por su gran versatilidad y simplicidad de operación.

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Electroforesis
COMPONENTES DEL DISPOSITIVO:

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Electroforesis
CAPILAR
Capilar de sílice.
Diámetro interno de 25-100 µm.
100
Cobertura de polimida.
Permeabilidad a la luz ultravioleta y visible.
Químicamente y eléctricamente estable.
Longitud 50-100 cm.

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FUENTE DE PODER
La migración empieza una vez se aplica el voltaje.
Corriente 10-200 µA.
200 A.
Tensión 20-40Kvconstantes, con el fin de obtener
Tensi
40Kv
una alta reproducibilidad en los tiempos de
migración.
migraci

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Electroforesis
ELECTRODOS Y VIALES

Electrodos de platino, teflón o carbón.
Viales, llamados recipientes electrodicos.
Material cristal.

Electrodo platino.

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Electroforesis
SISTEMA DE DETECCIÓN
Se utiliza el detector UV-vis.
Detección en columna.
Debe eliminarse polimida del capilar.
Longitud de la onda aprox 240nm.

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Electroforesis
ELECTROLITOS
Citrato 3.06pKa (movilidad), Fármaco, analgésico.
Citrato 5.40pKa.
Citrato
Fosfato 2.12pKa, PH 2.5.
Fosfato
Borato 4.75pKa, PH 9.3....