Electroforesis

Cuestionario:
1. Qué diferencia y semejanza existen entre una electroforesis nativa y una de denaturante. Cuál es la utilidad de cada una de ellas.
Diferencias: D= pérdida de la estructuratridimensional, por acción de un agente reductor como el ß-mercaptoetanol (ß-ME) o el ditiotreitol (DTT).
N= mantiene su forma tridimensional, no se aplica un agente reductor.
Semejanzas: D, N= lamigración puede ser proporcional a la carga de la molécula
Utilidad: N= pueden realizarse estudios de funcionalidad de dichas proteínas separadas (actividad enzimática, capacidad de unión de anticuerpos,unión a receptores, etc.)
D=se pueden comparar y determinar los pesos moleculares de proteínas analizadas.
o En una electroforesis desnaturalizante, es la que somete a las
proteínas a migraciónasegurando la completa desnaturalización
(pérdida de la estructura tridimensional). En esta situación la
migración es proporcional a la carga y al tamaño de la molécula pero
no a su forma.
o Enuna electroforesis nativa a las proteínas se les somete a una
migración sin desnaturalización. En esta situación las proteínas
migran en función de su carga, de su tamaño y de su forma. Ademásse mantienen en ciertos casos las interacciones entre subunidades y
entre proteínas, separándose los complejos.

2. Por que se escoge un pH básico para la preparación de la muestra y para laseparación.
Las numerosas cargas negativas que se introducen en la proteína con las moléculas de SDS deja a la proteína con cargas negativas, y se adicionas en un pH acido, las cargas positivas sepodrían adicionar a la proteína regenerando su estructura tridimensional perdiendo el efecto causado por el SDS.
Porque esto hace que tanto las proteínas grades como pequeñas se muevan con igualfuerza en el campo eléctrico en dirección del cátodo, es entonces cuando el gel puede separar las proteínas en función de su masa, y determinara su peso molecular.

3. Que es isolectroenfoque:...