Electroforesis

INTRODUCCIÓN
El estudiante de Biología debe tener un perfil completo, y debe de tener varios requerimientos, pero el principal es estar actualizado tanto en conocimientos, como en las técnicas utilizadas para la investigación de cualquier ámbito científico. Mas sin embargo nos enfocaremos en materia de genética.

En la Universidad de Sonora, se cuenta con un laboratorio de ecologíamolecular, en el cual se realizan investigaciones enfocadas al análisis de ADN. Es muy importante seguir las normas del laboratorio y seguir las indicaciones del maestro, para cumplir con el objetivo de las prácticas. Es muy importante conocer el objetivo general del laboratorio del curso de Genética, que es comprender los procedimientos básicos de un protocolo de análisis genético molecular. Esteobjetivo se cumplirá con la realización de extracción de ADN, cuantificación, amplificación con PCR, electroforesis y fotodocumentación, con estas técnicas se amplificara una sección del gen ARN ribosomal 18s.

Para la extracción de ADN es necesario la recolecta de una muestra, como se llevo a cabo en la práctica número uno. El objetivo fue la extracción de ADN de buena calidad a partir desangre. Este paso es de suma importancia ya que el tener una muestra pura y concentrada propicia un resultado correcto. Las técnicas de extracción han ido cambiando a través de los años, como antes se utilizaba el método de fenol-cloroformo-isomilalcohol, pero por cuestiones de tiempo y el tipo de reactivos, estas técnicas se han visto por cambios, por lo que en la práctica se utiliza el QIAampDNA Blood Mini Kit.

La muestra a ensayar se extraerá de sangre venosa con sistema vacutainer, utilizando la sangre fresca con anticoagulante EDTA.
La técnica de extracción de ADN se basa en la retención del ADN con una membrana de silíca se encuentra en una columna. Se hacen una serie de lavados que propician la eliminación de proteínas y otros compuestos. El ADN retenido es soltadocon la ayuda de un buffer (AE). El ADN obtenido es de un fragmento no mayor de 50kb, este se desnaturaliza con ciclos con temperatura controlada, por consiguiente puede ser amplificado para análisis.

El objetivo de la técnica seguida de la práctica dos, es la medición de concentración y pureza de ADN. Se llevo a cabo con el uso del espectrofotómetro de luz ultravioleta, el aparato solonecesita 1 a 2 μL de muestra, y sirve para medir la absorbancia A260/A280, con este dato es posible conocer la pureza de una muestra, basada en la ley de Beer-Lambert: OD=εCb. En la formula esta implicada la densidad óptica (OD), coeficiente de extinción (ε), concentración (C) y la ruta óptica (b). Lo que requerimos de la formula es el coeficiente de extinción promedio, en el caso para la solución deDNA de 1 mg/ml a 260 nm y 280 nm es de 20 a 10. Lo que es igual que 260 nm de solución de DNA de 50 μg/mL su coeficiente de concentración será de 1.0, aunque se puede considerar un rango de 1.8 a 2.0.

Por otra parte tenemos la reacción en cadena de la polimerasa, la cual se cumplió en la práctica número tres, de la cual su objetivo fue la amplificación de una región del gen que codifica elARNr 18S. Con la técnica se obtienen copias de un fragmento de ADN, a partir de la propiedad de las ADN polimerasas, se manipula la replicación por los ciclos, los cuales constan de cambios de bajas a altas temperaturas, esto para separar las fibras de ADN y replicarlas, este ciclo se repite varias veces para obtener varias copias. Para este método se usan polimerasas termoestables.
Para larealización de la práctica, se utilizó un termociclador, el cual calienta y enfría los tubos con las muestras y los reactivos que se adiciona. Estos tubos se calientan y enfrían fácilmente, gracias al material con el que están fabricados, ya que su pared es de capa delgada, permitiendo el cambio rápido de temperatura.
Además es importante destacar el uso de los oligos universales CAS1S y CAS2,...