Electroforesis



Electroforesis
Andrea Yulieth Salazar Polanía
Microbiología Industrial

Mediante la electroforesis es posible separar moléculas biológicas según su tamaño y su carga, bajo la influencia de un campo eléctrico a través de una matriz gelatinosa. Fue empleado por primera vez por en el año 1937, pero su importancia vino a incrementarse cuando en los años cincuenta E. L.Durrum y Arne W.K.Tiselius , impulsaron la electroforesis de zona.
Cuando una mezcla de moléculas ionizadas y con carga neta son colocadas en un campo eléctrico, ellas reciben una fuerza de atracción hacia el polo que posee carga opuesta, dejando transcurrir cierto tiempo las moléculas cargadas positivamente se desplazaran hacia el cátodo (el polo negativo) y aquellas cargadas positivamente se desplazaran hacia el ánodo(el polo positivo).
La velocidad de migración de la partícula es directamente proporcional al producto de su carga efectiva y el gradiente de potencial eléctrico e inversamente proporcional al coeficiente de fricción relativo a la talla y forma de la molécula, o sea, a la resistencia que le ofrece el medio. Se utiliza un gel que consiste de un polímero soluble de muy alto peso molecular queatrapa moléculas de agua y forma un tamiz que dificulta el movimiento de los solutos, provocando que la migración electroforética de las moléculas sea más lenta, pero el ensanchamiento del frente se verá reducido también.
Se encuentran varios tipos de electroforesis, como métodos de electroforesis de zona que se utilizan para la separación de mezclas complejas. Contienen pequeñas cantidades de ladisolución de proteínas a un soporte sólido, que se impregna con una solución tampón. Los soportes son en general polímeros y forman un gel poroso que restringe el movimiento de las moléculas a través del medio durante la electroforesis y disminuyen los flujos de convección del solvente.
Entre los soportes utilizados están los geles de poliacrilamida que se forman por polimerización de laacrilamida. Una de las desventajas que presenta este gel es su neurotoxocidad.


Es químicamente inerte, capaz de ser preparado de forma rápida. Forma, geles transparentes con estabilidad mecánica, insolubles en agua, relativamente no iónicos y que permiten buena visualización de las bandas durante un tiempo prolongado. Además tiene la ventaja de que variando la concentración de polímeros.
Existen 3formas diferentes de realizar electroforesis en geles de poliacrilamida: lámina vertical,varilla cilíndrica y lámina horizontal. Los geles más finos son más económicos porque emplean menos reactivos y pueden ser eficientemente refrigerados durante la corrida, por lo tanto pueden ser corridos a mayor voltaje, lográndose así una alta resolución en corto tiempo. Los tiempos de tinción y destinción sonmenores también porque la difusión es muy rápida; sin embargo como el gel es tan fino es más propenso a perturbaciones y problemas en la polimerización.
Uno de los usos de este método de electroforesis de gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio se utiliza para la tipificación de los perfiles proteicos urinarios, pero no son rutinarios en el laboratorio clínico. Se compararon los PPUmediante uroproteinograma electroforético (URO) y SDS-PAGE, ambos coloreados con tinción argéntica y la medición por turbidimetría de las proteínas de bajo peso molecular. El objetivo del estudio fue establecer la sensibilidad de la coloración argéntica en SDS-PAGE para poder utilizarla principalmente en la definición de proteinuria tubular. Se procesaron 105 muestras de orina de 24 h de pacientesadultos que ingresaron al laboratorio con pedido de clearance de creatinina. Se obtuvo una sensibilidad del 86 y 94%, y una especificidad del 93 y 97%, respectivamente. El SDS-PAGE con coloración argéntica, en orinas sin concentrar, puede ser utilizado como una herramienta útil en la evaluación de daño tubular, proporcionando alta sensibilidad y especificidad. (1)
La electroforesis en geles de...