electroforesis

electroforesis

Generalidades
• Técnica importante en el análisis sistemático
de ácidos nucleícos y proteínas.
• Moléculas poseen una carga (-) o (+)
– Cuya magnitud depende del PH en el medio enel
que se encuentran.

• Ejemplo
-proteínas (+) o (-) pretatamiento para darles carga
(-)
-Ácidos Nucleícos (-)

• “ La migración proporcional de las moléculas a través
de un gel u otro tipo de matrizporosa, según su peso
molecular o tamaño; movimiento generado por un
campo eléctrico”

• Ya que las moléculas tienen una carga; pueden
desplazarse cuando se ven sometidas a un campo
eléctrico, haciael polo de carga opuesta a la molécula.

Elementos de la electroforesis

Cámara de electroforesis

• Dispositivo que permite la generación del campo
eléctrico, alrededor de un gel donde se depositanlas
muestras
• Cuenta con lo dos polos (+) y (-)

Gel
Geles de agarosa:
ACIDOS NUCLEICOS

Geles de acrilamida:
PROTEINAS

• Semisólido y gelatinoso
• Contiene polímeros que forman microporos
pordonde circulan las moléculas

Buffer de corrimiento

• Este buffer contiene la misma composición (pH y material) que
el gel
• Proporciona el medio para la trasmisión de corriente eléctrica.
• Mantieneel pH sin variaciones durante el procedimiento

Marcador de peso molecular

• Moléculas de ADN o proteicas que permiten
determinar, en comparación, el tamaño de las
moléculas contenidas en la muestraBuffer de carga
• Un amortiguador que tiene como fin brindar
– Peso
– Densidad
– Color

Facilita el deposito en el pocillo
Evita salida de la muestra del gel
Permite monitorear el corrimientoTrasluminador ultravioleta

• Trasmite la luz del exprecto ultravioleta a través de la muestra
• Excitando a la molécula cromogénica que emite energía
fluorescente.

Procedimiento

Prepara el
gel deagarosa o
acrilamida

Realizar la
corrida
electroforética
al voltaje
pertinente

Mezclar las
muestras con
un buffer de
carga
adecuado

Cargar las
muestras en el
gel

Visualizar
ácidos
nucleícos...