Elementos p modificados: una herramienta en el clonaje de genes de drosophila
Páginas: 21 (5202 palabras)
Publicado: 7 de octubre de 2010
Elementos P modificados: una herramienta en el clonaje de genes de Drosophila
INTRODUCCIÓN
Drosophila melanogaster es la mayor especie experimental utilizada en genética, estudiada por Castle en 1901 y usada por Morgan con propósitos genéticos en 1909 (Roberts, 1998), y es además un organismo enormemente útil para el estudio del desarrollo debido entre otras características precisamente asu bien caracterizado genoma (Wilson, 1989)
Diferentes técnicas genéticas se han empleado en el estudio de Drosophila , pero dadas las limitaciones de las técnicas de la genética clásica en áreas como el estudio de genes del desarrollo, otras técnicas que permitiesen clonar e identificar los genes y su función han sido desarrolladas (Wilson, 1989). Entre estas, uno de los métodos más rápidos yútiles es el uso de elementos P modificados.
Los elementos P pertenecen en su origen a un conjunto de segmentos móviles, secuencias de ADN con distintas características que son capaces de replicarse y propagarse por el genoma, que existen como constituyentes intrínsecos del genoma de los organismos y se denominan transposones (Frutos, 1996).
Estos transposones se agrupan en dos clases: unaprimera donde, los también llamados retrotransposones, se movilizan a través de ARN, y una segunda donde estos elementos móviles “saltan” directamente a través de ADN para lo que contienen en su estructura o secuencia la posibilidad de codificar para una proteína, la transposasa, que es indispensable para esta transposición, así como también para otra proteína que codifica para un represor de esteproceso.
A este último grupo, minoritario, pertenecen los elementos P (Frutos, 1996).
Aparte de las funciones que se les suponen a los transposones, y sobre las que se hacen hipótesis por constituir parte del genoma de forma natural (Frutos, 1996), el uso de los transposones elementos P es desde hace un par de décadas una herramienta muy útil, para estudiar genes en organismos comoDrosophila, bien por la creación de mutaciones letales (Roberts, 1998; Giniger, 1994), o sin necesidad de crear esa mutación, también para la detección de elementos reguladores del genoma con una distribución espacio-temporal concreta (O’Kane,1987).
Y por supuesto también, de forma complementaria, para el clonaje de los genes adyacentes a la inserción de los elementos P.
En el caso que nos ocupa,elementos P modificados se han usado como herramienta para clonar genes de Drosohila con una papel fundamental en el crecimiento y proyección espacial de los axones y por tanto en el desarrollo del sistema nervioso; en concreto se trata del gen lola (lontgitudinals lacking) (Giniger, 1994).
Esta modificación en los elementos P es fundamental para la detección de ‘enhancers’ (Wilson, 1989), paradetectar su capacidad de transposición en un línea determinada o seguir los sucesos de la transposición (Frutos, 1996) y para su clonaje. De este modo y según las necesidades de cada experimento, existen una serie de vectores transformados artificialmente (Bellen, 1990), entre los cuales se encuentra el Plac W, usado en este caso. (Fig. 1) y que consta de:
[pic]
Figura 1: Estructura del elementoP modificado (guión de prácticas), donde se puede observar las distintas partes que lo componen, así como los posibles sitios de restricción por enzimas a tener en cuenta para el “rescate del plásmido”. Adyacente al extremo 3’ se encuentra el gen susceptible de ser clonado.
-el gen lacZ, de origen bacteriano (E.coli) que codifica para la enzima β -galactosidasa con un promotor débil (el mismopromotor del elemento P para la transposasa) (O’Kane, 1987), de modo que es susceptible de ser influenciado por ‘enhancers’ cercanos pertenecientes al genoma de la mosca (Bellen, 1990). Dependiendo de su inserción la expresión de la B-galactosidasa se puede seguir durante el desarrollo y además permite definir su patrón de expresión espacio-temporal (Roberts, 1998)
-un marcador de ojos de...
INTRODUCCIÓN
Drosophila melanogaster es la mayor especie experimental utilizada en genética, estudiada por Castle en 1901 y usada por Morgan con propósitos genéticos en 1909 (Roberts, 1998), y es además un organismo enormemente útil para el estudio del desarrollo debido entre otras características precisamente asu bien caracterizado genoma (Wilson, 1989)
Diferentes técnicas genéticas se han empleado en el estudio de Drosophila , pero dadas las limitaciones de las técnicas de la genética clásica en áreas como el estudio de genes del desarrollo, otras técnicas que permitiesen clonar e identificar los genes y su función han sido desarrolladas (Wilson, 1989). Entre estas, uno de los métodos más rápidos yútiles es el uso de elementos P modificados.
Los elementos P pertenecen en su origen a un conjunto de segmentos móviles, secuencias de ADN con distintas características que son capaces de replicarse y propagarse por el genoma, que existen como constituyentes intrínsecos del genoma de los organismos y se denominan transposones (Frutos, 1996).
Estos transposones se agrupan en dos clases: unaprimera donde, los también llamados retrotransposones, se movilizan a través de ARN, y una segunda donde estos elementos móviles “saltan” directamente a través de ADN para lo que contienen en su estructura o secuencia la posibilidad de codificar para una proteína, la transposasa, que es indispensable para esta transposición, así como también para otra proteína que codifica para un represor de esteproceso.
A este último grupo, minoritario, pertenecen los elementos P (Frutos, 1996).
Aparte de las funciones que se les suponen a los transposones, y sobre las que se hacen hipótesis por constituir parte del genoma de forma natural (Frutos, 1996), el uso de los transposones elementos P es desde hace un par de décadas una herramienta muy útil, para estudiar genes en organismos comoDrosophila, bien por la creación de mutaciones letales (Roberts, 1998; Giniger, 1994), o sin necesidad de crear esa mutación, también para la detección de elementos reguladores del genoma con una distribución espacio-temporal concreta (O’Kane,1987).
Y por supuesto también, de forma complementaria, para el clonaje de los genes adyacentes a la inserción de los elementos P.
En el caso que nos ocupa,elementos P modificados se han usado como herramienta para clonar genes de Drosohila con una papel fundamental en el crecimiento y proyección espacial de los axones y por tanto en el desarrollo del sistema nervioso; en concreto se trata del gen lola (lontgitudinals lacking) (Giniger, 1994).
Esta modificación en los elementos P es fundamental para la detección de ‘enhancers’ (Wilson, 1989), paradetectar su capacidad de transposición en un línea determinada o seguir los sucesos de la transposición (Frutos, 1996) y para su clonaje. De este modo y según las necesidades de cada experimento, existen una serie de vectores transformados artificialmente (Bellen, 1990), entre los cuales se encuentra el Plac W, usado en este caso. (Fig. 1) y que consta de:
[pic]
Figura 1: Estructura del elementoP modificado (guión de prácticas), donde se puede observar las distintas partes que lo componen, así como los posibles sitios de restricción por enzimas a tener en cuenta para el “rescate del plásmido”. Adyacente al extremo 3’ se encuentra el gen susceptible de ser clonado.
-el gen lacZ, de origen bacteriano (E.coli) que codifica para la enzima β -galactosidasa con un promotor débil (el mismopromotor del elemento P para la transposasa) (O’Kane, 1987), de modo que es susceptible de ser influenciado por ‘enhancers’ cercanos pertenecientes al genoma de la mosca (Bellen, 1990). Dependiendo de su inserción la expresión de la B-galactosidasa se puede seguir durante el desarrollo y además permite definir su patrón de expresión espacio-temporal (Roberts, 1998)
-un marcador de ojos de...
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