Elisa, pruebas serologicas

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|Ensayo de Inmunoadsorción con Enzimas Ligadas (ELISA) |
| El PTA – ELISA (plate- trapped antigen ELISA) |
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|El durazno puede presentar desecamiento de las ramas, con aspecto de cancro y exudado |
|gomoso; laspruebas de patogenicidad han llevado en algunos casos a identificar a una |
|bacteria causante de este estado y conocida como Pseudomona syringae pv. syringae,agente |
|causal del cancro bacteriano del duraznero a nivel mundial (Guevara et al., 2000) |
|Esta práctica pretende identificar a la bacteria causante de la Muerte regresiva del |
|durazno y cuya sospecha recae en P.syringae pv. syringae, la identificación se pretende |
|hacer por medio de la metodología de PTA – ELISA. |
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Ensayo de Inmunoadsorción con Enzimas Ligadas (ELISA)

Introducción

La técnica de ELISA (Enzyme Linked Inmuno Sorbent Assay) es un procedimiento de ensayo inmuoenzimático, que se basa en la detección de antígeno o anticuerpo, inmovilizado sobre una fase sólida ymediante anticuerpos que directa o indirectamente producen una reacción, la prueba recurre al empleo de inmunógenos, haptenos o anticuerpos marcados con una enzima cuyo producto colorido, puede ser medido espectrofotométricamente (Lindell, 2003).
Guzman (2004) menciona que la prueba de ELISA se basa en múltiples teorías para su realización, entre las cuales podemos encontrar:
1. El antígeno yanticuerpo pueden enlazarse a una superficie portadora insoluble y retener su reactividad inmunológica;
2. Las enzimas tienen actividad específica alta y convierten una cantidad relativamente grande de sustrato en producto detectable, lo que permite detectar concentraciones muy bajas del ligando;
3. La actividad enzimática o reactividad inmunológica de los conjugados se preserva y permaneceestable durante el análisis y el almacenamiento; y
4. Las enzimas no están presentes en el líquido biológico que se va a analizar.
Dependiendo de lo requerido, podemos hallar que la prueba de ELISA se organiza en diversas variantes, que pueden ser enlistadas cómo sigue:
• Anticuerpos marcados
✓ ELISA directo
✓ ELISA indirecto
✓ ELISA sándwich
▪Doble (DAS)
▪ Heterologo (HADAS)
• Antígenos marcados
✓ ELISA competitivo
Los marcadores comúnmente usados se enlistan en el cuadro siguiente.

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Para caso de fitopatógenos está técnica es confiable y rápida, y la variante que mejor ha ayudado en esta área es la que se conoce como DAS-ELISA (Double Antibody Sándwich) (Salazar, 1990); las ventajas que presentaesta variante se hacen presentes cuando se necesita diagnosticar antes de que aparezcan los síntomas de la enfermedad, o para seleccionar semillas sanas o incluso plantaciones (Dyakov, et al., 2007)
Otro formato de ELISA es el llamado DAC (direct antigen coating). El PTA – ELISA (plate- trapped antigen ELISA) es otro nombre que recibe la prueba de DAC. En comparación a DAS – ELISA, en la pruebade PTA – ELISA, los antígenos son inmovilizados sobre la fase solida. En general, este formato es predominantemente usado en los análisis de respuesta inmune a un antígeno y se prefiere por su sensibilidad a virus y bacterias. Desafortunadamente para el diagnóstico de patógenos de las plantas los antígenos bien caracterizados no siempre están disponibles (Dyakov, et al., 2007).

Objetivo...