ELISA

ELISA (Enzyme linked Immuno-Sorbent Assay)

Se basa en la detección antígeno(Ag) o anticuerpo (Ac), inmovilizado sobre una fase sólida y mediante anticuerpos que directa o indirectamente producenuna reacción, la prueba recurre al empleo de inmunógenos, haptenos ó anticuerpos marcados con una enzima cuyo producto colorido, puede ser medido espectrofotométricamente. Este principio tiene laspropiedades de un inmunoensayo ideal: es versátil, robusto, simple en su realización, emplea reactivos económicos y consigue, mediante el uso de la fase sólida, de una separación fácil entre la fracciónretenida y la fracción libre.
Dicha reacción enzima sustrato produce una transformación del sustrato incoloro a un producto con color que se cuantifica por espectofotometría y que es proporcional a lacantidad de inmunocomplejos formados, lo que es igual, a la cantidad de Ag o de Ac presentes en la muestra.
Se utilizan microplacas de 96 pocillos de plástico tratado para aumentar su capacidad deadsorción (en su superficie) de moléculas y con fondos de pocillo ópticamente claros para poder realizar las medidas de densidad óptica en instrumentos específicos.
Los lectores ELISA sonespectrofotómetros capaces de realizar lecturas seriadas de cada uno de los pocillos de la placa ELISA. A diferencia de un espectrofotómetro convencional, con capacidad de leer todas las longitudes de onda delultravioleta y el visible de manera continua, los lectores de ELISA disponen de sistemas de filtros que sólo permiten la lectura de una o pocas longitudes de onda. Son la que se corresponden con lasnecesarias para determinar la densidad óptica de los cromógenos más comúnmente utilizados.

Hay 4 tipos de ELISA, pero todos ellos tienen unos pasos necesarios y fundamentales, que son:

-Sensibilización de la placa.
- Bloqueo de espacios vacíos.
- El Ag o el Ac se fija a una superficie.
- Aplicación del espécimen de prueba.Controles positivo y negativo
- Detección y caracterización por...