Elisa

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NUEVO LEÓN
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

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Virología
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ELISA
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Nombre del profesor: Dr. Juan Francisco Contreras Cordero
Nombre del alumno: Vianey Solis Flores
Grupo: 273
Matricula: 1352517

1. Introducción:
 Los Rotavirus son virus ARN que pertenecen a la familia Reoviridae, se encuentran ampliamente distribuidos por el mundo y han sido considerados los agentes de mayorresponsabilidad en la producción de las gastroenteritis infantiles de causa viral, que provocan el 50 % de las hospitalizaciones por diarreas agudas en niños menores de 4 años.1
El diagnóstico de laboratorio de estos virus está basado fundamentalmente en su detección en las heces fecales, se emplean variadas técnicas tales como son la microscopia electrónica, la contrainmunoelectroforesis, lainmunofluorescencia indirecta, la electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE), la aglutinación por látex, el ELISA, la hibridación de ácidos nucleicos y otras.(1)
Entre estas técnicas se encuentra el Dot ELISA, descrito por Towbin et al. en 1979,4 quienes utilizaron por primera vez el método de inmunoblotting para transferir proteínas del ribosoma desde un gel de poliacrilamida a una membrana denitrocelulosa. Posteriormente las técnicas de inmunoblott han sido usadas para la detección de antígenos y anticuerpos a diferentes microorganismos, se emplean sistemas de amplificación como el marcaje del conjugado con oro coloidal para aumentar la sensibilidad del método.(2)
La técnica de ELISA (Enzyme Linked InmunoSorbent Assay) es un procedimiento de ensayo inmuno enzimático; Se basa en ladetección antígeno (Ag) o anticuerpo (Ac), inmovilizado sobre una fase sólida y mediante anticuerpos que directa o indirectamente producen una reacción, la prueba recurre al empleo de inmunógenos, haptenos ó anticuerpos marcados con una enzima cuyo producto colorido, puede ser medido espectrofotométricamente.
Este principio tiene las propiedades de un inmuno ensayo ideal: es versátil, robusto, simple ensu realización, emplea reactivos económicos y consigue, mediante el uso de la fase sólida, de una separación fácil entre la fracción retenida y la fracción libre.

Las enzimas utilizadas se muestran en el cuadro 1

2.2 Las bases de realización de una ELISA son:

* Sensibilización de la placa.
* Bloqueo de espacios vacíos.
* El Ag o el Ac se fija a una superficie.
*Aplicación del espécimen de prueba.Controles positivo y negativo 
* Detección y caracterización por Ac. 2°marcado.
* Incubación con la muestra.
* Incubación con el sistema de detección.
* Adición del sustrato

2. Objetivo:
 
* Cuantificar el contenido de antígeno(gammaglobulina humana) y la dilución del conjugado del Anticuerpo (anti-gammaglobulina) para ésta técnica.

*Conocer el fundamento y las fases en la realización de la técnica de ELISA, y cuáles son las variantes de este método.

3. Metodología

1. Diluir la solución de gammaglobulinas.
2. Rotular tubos del 1 al 7 del A al G.
3. Colocar en 6 tubos solución de IgG acepto el A.
4. Colocar un testigo negativo en la lgG terminandoen la A.
5. Colocarlos en una cámara húmeda 18hr4°C.
6. Eliminar el sobrenadante durante 30m.
7. Lavar con PBS Tween 4 veces y reposar 1 min.
8. Etiquetar 11 tubos y colocarle el conjugado.
9. Colocar regresivamente un testigo conjugado einc a 37°c 1hr.
10. Lavar con PBS tween.
11. .Adicionar sustrato con el cromógenoIncubar 15 min a 37°C.
12. leer a 490 nm en lector de ELISA.

4. Resultados

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