ELISA

PRÁCTICO:
ELISA: Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas/ enzimoinmunoensayo.
Se trata de un examen de laboratorio comúnmente usado para detectar anticuerpos en la sangre, para el diagnóstico de VIH.
Es necesaria una muestra de sangre. La muestra se envía a un laboratorio donde el anticuerpo o antígeno objeto de estudio se vincula a una enzima específica. Si la sustancia a estudiar estápresente en la muestra, la solución de la prueba se torna de un color diferente.
Se agrega un Ac primario marcado (unido covalentemente) con una enzima (conjugado enzimatico). Este último permite revelar la interacción Ag-Ac.
En este practico se utilizó un ELISA indirecto por lo tanto se agrega un segundo Ac conjugado con una enzima (Ac secundario) el cual es especifico contra los Acs primarios.
Enel caso de un test para VIH:
El Ac primario es el total de Acs específicos contra p24 presente en el suero del paciente.
El Ac secundario es uno específico contra IgG humanas.
En cada pocillo se agregó suero procedente de cada paciente y luego se le agrego un antisuero conteniendo Acs contra Igs humanas (anti IgG) los cuales se encuentran conjugados a una enzima. El desarrollo del color se lograagregando sustrato para la enzima y se evalua la extensión de la interacción Ag-Ac.
Objetivo general:
Comprender las técnicas inmunológicas ELISA y Western Blot.
Determinar la presencia/ausencia de Acs específicos contra la enfermedad por medio de la técnica ELISA indirecto.
Objetivos específicos:
Determinar la presencia de anticuerpos anti p-24 en sueros de 3 pacientes.
Determinar si lospacientes analizados son 0+, 0- o poseen serología indeterminada.
Confirmar los resultados obtenido por el ELISA analizando los resultados del WB.

Controles:
La prueba ELISA es un procedimiento que involucra muchos pasos por lo tanto se debe controlar adecuadamente para obtener el máximo rendimiento en precisión y exactitud.
Estos permite evaluar la reactividad de los sueros problema.
También tienen elobjetivo de asegurar el cumplimiento de todos los procedimientos establecidos para el trabajo del laboratorio y el monitoreo de la precisión de los resultados con el propósito de detectar y de corregir eventuales errores.
Deben ser incluidos para verificar que la prueba esta funcionando correctamente.
Se utilizaron en este práctico 5 controles.
Los controles positivos y negativos son importantesya que permiten validar la técnica empleada en cada etapa.
Control negativo (C-): corresponde a un pocillo en el cual se colocó suero de individuos sanos (no inmune), el cual al carecer de Acs específicos no produce reactividad. Es el suero que se sabe de antemano que debe dar reacción negativa.
Control positivo (C+): corresponde a un pocillo en el cual se colocó suero de individuos enfermos, elcual al presentar ACs específicos produce reactividad. Es el suero que se sabe que va a dar reacción positiva.
Control sin Ags: corresponde a un pocillo donde se colocó suero del control positivo sin Ags y que contiene todos los componentes del ELISA (Buffer-PTG). Este no está sensibilizado.
Control de Ac secundario: posee el Ag y el Ac secundario, no contiene Ac primario ni suero de pacientessanos o enfermos solo el buffer (PTG).
Control blanco: Lleva únicamente el buffer, hasta el agregado final del agente de desarrollo de color (OPD- solución de revelado). No esta sensibilizado, ya que no contiene ni Ags ni Acs ni suero.
Es importante colocar un control blanco para restar o determinar la presencia de sustancias que influyan en la técnica dando reacciones falsas positivas. Es un controlen el que el virado de color se da únicamente por una reacción específica.
El control que falto fue el del Ac primario, el cual va a presentar el Ag y Ac primario, además del buffer. No contiene Ac secundario.

Interpretación de Resultados
REACTIVO: Se detecta la presencia de antígeno y/o anticuerpo del agente etiológico correspondiente.
NO REACTIVO: No se detecta la presencia de antígenos y/o...