ELISA

ELISA (Enzime Linked
Immunoassay):
Bases Teóricas y Fundamentos
Prácticos
Versión a utilizar
en sesiones: 6 y 9

Ensayo inmunoenzimático
‹ Definición:

– Es una técnica que combina la especificidadde los anticuerpos con la sensibilidad de un
ensayo enzimático. Esta técnica es utilizada
para medir tanto antígenos como anticuerpos,
de manera cualitativa, semicuantitativa y
cuantitativahttp://www.chemicon.com/resource/ANT101/a2C.asp

Las inmunoglobulinas:
estructura y función

Antígenos e Interacciones
Antígeno-anticuerpo
Moléculas
complejas extrañas
al organismo, de
naturaleza proteicaque son capaces de
inducir una RI y
combinarse con los
elementos
efectores
de la misma

••Enlaces
Enlaces iónicos
••Enlaces
Enlaces
de
hidrógeno
••Interacciones
Interacciones
hidrofóbicas
••FuerzasFuerzas de van
der Waals
••Interacciones
Interacciones
dipolo
-dipolo
dipolo-dipolo

Fases de las respuesta inmune
humoral

Abbas
Abbas A,
A, Inmunología
Inmunología celular
celular yy molecularmolecular 2000
2000

FUNDAMENTO DEL ELISA
Muestra
Muestra
Ag
Ab
Ag
Ab
Ag-Ab
Ag-Ab-Enzima

Fase Sólida
Enzima unida al
anticuerpo

Substrato

Compuesto
Compuesto coloreado
coloreado

ELEMENTOS DEL ELISA
•Tipo de muestra
Antígenos
Anticuerpos
• Fase sólida
• Enzimas
• Lavados
• Substratos

Lequin RM, Clin Chem, 2005; 51:2415

• Revelador de la actividad enzimática

TIPO DE MUESTRA
• Orina

•Suero

•Saliva

• Heces

• LCR

• Otros

ANTÍGENO
•Completo (Organismo, estructura
íntegra)

•Extracto total

(Ultrasonido,solventes)

Fase sólida

•Fracción Purificada (Núcleo, de

membranas,

organelas)•Péptido sintético

ANTICUERPOS: Policlonales (infecciones naturales)
Monoclonales
Producción de Anticuerpos Monoclonales
Inmunización de un ratón para
estimular la producción de
anticuerpos

Célulasformadoras de
anticuerpo aisladas del bazo

Células tumorales crecen
en cultivos tisulares

Conjugado
Conjugado con
con la
la
enzima
enzima
Células formadoras de anticuerpo se fusionan con
células...