Embriogenesis en banano

EVALUACIÓN DE LA PRODUCCIÓN DE FITOQUÍMICOS A PARTIR DE CULTIVO DE CÉLULAS EN SUSPENSIÓN DE Nerium oleander

JUAN ALEJANDRO PÉREZ BRAN INGENIERO QUÍMICO

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA SEDE MEDELLÍN FACULTAD DE CIENCIAS MEDELLÌN 2010

EVALUACIÓN DE LA PRODUCCIÓN DE FITOQUÍMICOS A PARTIR DE CULTIVO DE CÉLULAS EN SUSPENSIÓN DE Nerium oleander

JUAN ALEJANDRO PÉREZ BRAN INGENIERO QUÍMICOTesis de maestría en Ciencias - Biotecnología

Director MARIO ARIAS ZABALA. Ing. Químico, Ph. D.

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA SEDE MEDELLÍN FACULTAD DE CIENCIAS MEDELLÌN 2010

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AGRADECIMIENTOS Al Director y asesor Mario Arias Zabala, por su apoyo permanente, perseverancia y paciencia en la realización del proyecto de investigación. Al profesor Kenneth Roy Cabrera por sus aportesen el análisis estadístico de los resultados. A los investigadores del Laboratorio de Bioconversiones de la Universidad Nacional de Medellín, especialmente Juan Manuel Restrepo y Miguel Octavio Pérez por su colaboración en la parte experimental. Al profesor Jair Gaviria, director del Laboratorio de Análisis Instrumental de la Facultad de Ciencias de la Sede Medellín, por su colaboración con losanálisis cromatográficos. A la Universidad Nacional de Colombia y la Dirección de Investigación Medellín (DIME) por el financiamiento de este trabajo. A mi esposa, por el apoyo constante, moral e incondicional en la continuación y culminación de este trabajo.

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CONTENIDO INTRODUCCIÓN ................................................................................................... 12 1.MARCO TEÓRICO ......................................................................................... 16 1.1 ASPECTOS SOBRE Nerium oleander ........................................................ 16 1.1.1 Generalidades ...................................................................................... 16 1.1.2 1.2 1.3 Metabolitos y actividad biológica de Nerium oleander ......................18 OBTENCIÓN DE CALLOS ...................................................................... 20 MEDIOS DE CULTIVO ............................................................................ 22 Macronutrientes ................................................................................ 22 Micronutrientes ................................................................................. 23Vitaminas .......................................................................................... 24 Hormonas ......................................................................................... 25 Cinética de crecimiento celular ......................................................... 28 Métodos para medir el crecimiento de las células en suspensión .... 29 Características de las suspensiones................................................ 30

1.3.1 1.3.2 1.3.3 1.3.4 1.4 1.4.1 1.4.2 1.4.3 1.5 1.6

SUSPENSIONES CELULARES .............................................................. 26

METABOLITOS SECUNDARIOS ............................................................ 31 INDUCCIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS ................................. 31 Selección de células de altaproducción........................................... 32 Manipulación de nutrientes para incrementar el rendimiento ........... 33 Precursor alimenticio ........................................................................ 34 Elicitación ......................................................................................... 34

1.6.1 1.6.2 1.6.3 1.6.4 2 2.1 2.2 3 3.1 3.2OBJETIVOS.................................................................................................... 38 GENERAL ............................................................................................... 38 ESPECÍFICOS ........................................................................................ 38 PROCEDIMIENTOS GENERALES ......................................................... 39...