embriologia

Capacitación Sangre de Cordón-CONCIBE. (Septiembre 2011- Febrero 2012)

Laboratorio Sangre de Cordón en Guadalajara, Jalisco.

En este laboratorio existe un proceso central en el cual se realiza el aislamiento y conteo de células mononucleadas para su criopreservación, además de realizar también el conteo de células madre hematopoyéticas (CD34+) todo esto a partir de sangre de cordónumbilical obtenida en el alumbramiento. Además de este proceso se realizan determinaciones conferidas a un laboratorio considerado como banco de sangre, estas determinaciones incluyen la determinación del tipo sanguíneo en la sangre obtenida del cordón umbilical, el análisis serológico de la sangre de la madre con la finalidad de encontrar una posible infección viral, los agentes patógenos que se evalúanson: Tripanosoma Cruzi, Treponema Pallidum, HIV, HVB, HVC y Brucella sp.

A continuación describiré las actividades de las cuales he sido participe y las cuales he aprendido a realizar en su totalidad puntualizando las consideraciones que se deben de tener en dichas actividades, esto con la finalidad de demostrar mi conocimiento y manejo de las distintas áreas del laboratorio.

Actividadesen laboratorio y habilidades adquiridas.

Dentro del proceso central realizado en sangre de cordón se deben de tomar en cuenta los siguientes puntos críticos, los cuales nos dan la certeza de la obtención de una muestra adecuada para su criopreservación.

Recepción y evaluación inicial de la apariencia y cantidad de células en la muestra. En este apartado se debe considerar primero que nadala fecha de obtención de la muestra ya que una muestra con más de 72 h de obtención difícilmente se separa bajo nuestra metodología debido a la amplia hemolisis que esta podría presentar, además de esto muestras con bajo volumen tienden a presentar esta hemolisis en un menor tiempo, es por esto que el segundo punto a evaluar es el volumen de la muestra que debe ser mayor a 10 mL de muestra , esdecir, aproximadamente 73 mL de volumen total en la muestra dados los 63 mL de anticoagulante que estas bolsas contienen, esta consideración de volumen se da referida al tercer punto a considerar el cual es el número mínimo de células mononucleadas que se deben de aislar esto considerando el requerimiento mínimo para una posible terapia en la que estas células se podrían utilizar, este conteo seobtiene al realizar una biometría hemática, en la cual debemos obtener un conteo mayor o igual a 150 millones de células mononucleadas. Si alguna de las muestras recibidas no cumplen con estos requerimientos mínimos no se puede proseguir con su procesamiento y la congelación debe ser cancelada. Además de todas estas consideraciones se debe observar que la bolsa no esté dañada o contenga aire en suinterior ya que esto podría ser ocasionado por una posible contaminación bacteriana.

Aislamiento celular. Este es el proceso central realizado en el laboratorio el cual se basa en la separación de las células eritrocitarias de las células blancas, esto se realiza sedimentando los eritrocitos al agregar dextran al 6 %, mientras que las células mononucleadas permanecen en el sobrenadante, estasson recuperadas del mismo al centrifugarlas a 3200 rpm por 10 minutos, estas recuperación se hace dos veces. Al final de este proceso se realiza otra biometría hemática para obtener un conteo final y saber el porcentaje de células recuperadas para después resuspender este concentrado celular en un volumen adecuado para tener alrededor de 200 millones de células por cada vial congelados,considerando un mínimo de 75 millones de células en cada criotubo. A este concentrado celular se debe agregar un 5 % v/v de criopreservador que en este caso se trata de DMSO, el cual se debe agregar lentamente y en frío para evitar un daño citotóxico elevado en el concentrado celular. Posteriormente se toman los viales y se procede a su congelación en un equipo totalmente automatizado el cual tiene...