embriones de pollo

CURSO DE BIOLOGÍA DEL DESARROLLO 2009

Práctico:
“Métodos de cultivo y manipulación de embriones tempranos de pollo”
Docente responsable: Flavio Zolessi

Introducción:
El embrión de pollopresenta muchas ventajas cuando interesa estudiar las etapas más
tempranas del desarrollo del sistema nervioso. Los procesos morfogenéticos tempranos
son muy similares a los de los mamíferos (dado quepertenecen al mismo grupo de los
Amniotas), pero casi todo el desarrollo ocurre fuera del cuerpo de la madre. Es posible,
por lo tanto, observar y manipular el desarrollo temprano sin necesidad demétodos
demasiado complejos o costosos de cultivo embrionario. El método más sencillo
consiste en generar una “ventana” en la cubierta exterior del huevo, a través de la cual
se puede observar ymanipular el embrión. Como esta aproximación puede tener
algunas limitaciones, sobre todo en cuanto al acceso mediante microscopía, también se
han desarrollado distintos métodos de mantenimiento de losembriones de pollo fuera de
la cáscara. En este práctico aprenderemos a realizar dos de ellos, muy relacionados: el
cultivo de New y el cultivo EC (que en inglés suena igual que “easy”, fácil). Elprimero
requiere algo más de materiales especializados que el segundo, y es especialmente
indicado para las etapas más tempranas, desde la gastrulación hasta el inicio de la
morfogénesis del tuboneural y vesículas encefálicas. El segundo suele ser mejor para
estudiar embriones desde el comienzo de la neurulación hasta etapas más avanzadas de
la morfogénesis del tubo neural.
Esquema delpráctico:
Día 1 –
- Extracción de embriones para cultivos de New y EC, e inicio de los cultivos.
- Datación de embriones de pollo según Hamburger-Hamilton.
- Marcado de territorios embrionariospresuntivos con trazadores lipofílicos
fluorescentes (DiI y DiO).
Día 2 –
- Observación y fijación de embriones en cultivo.
- Extracción y fijación de embriones “control” (incubados dentro de la...