Empleo De Micropipetas, Espectrofotómetro Y Preparación De Diluciones

RESUMEN

En la práctica estudiamos el empleo de las micropipetas, el espectrómetro y también la preparación de disoluciones, esto importante porque en la bioquímica se necesita obtener medidas exactas y reproducibles, además de transferir pequeños volúmenes de líquidos. El propósito de esta práctica es que nos preparemos con el manejo de estos instrumentos y a su vez prepara unasdisoluciones con volúmenes exactos y conocer la absorción de luz del sulfato de cobre.
Esto lo hicimos de la siguiente manera se tomó una micropipeta y las puntas del tamaño correcto, se colocó el volumen menor que esta puede medir, después se colocó las puntas desechables y se llenaron con el volumen deseado con agua deisonizada, esto se transfirió a un recipiente platico en la balanza, esto se realizócinco veces para el volumen menor de la micropipeta y también para el volumen mayor de esta. Además realizamos la lectura de la adsorción de luz para la solución de sulfato de cobre (CuSO3) 0.3M desde 350 a 700nm con la ayuda del espectrofotómetro y preparamos unas disoluciones a partir de la solución 0.3M de CuSO3 usando como solvente el agua y también se hizo la lectura de la absorbancia de cadauna a 700nm.
Lo que encontramos en los resultados fue que las micropipetas pueden tener tanto un volumen menor o mayor con el cual logramos volúmenes exactos, pero se debe realizar una calibración para hacer un buen uso de ellas, además de conocer un porcentaje de error, en la absorción de luz vemos que a medida que cambia la longitud de onda la absorción de luz va variando.
Aprendimos que deacuerdo a las concentraciones y sus disoluciones obtendremos una absorción de luz que puede cambia, además que con la ayuda de las micropipetas podemos dar volúmenes exactos como es lo esperado, aunque pueden suceder error personales que pueden cambiar la exactitud de estos.

CALULOS Y RESULTADOS

Tabla 1. Calibración de la micropipeta 0100 μL y 0010 μL
MICROPIPETA VOLUMEN MENOR VOLUMENMAYOR
PESO 1 0,0056 g 0,0967 g
PESO 2 0,0060 g 0,0972 g
PESO 3 0,0059 g 0,0962 g
PESO 4 0,0063 g 0,0916 g
PESO 5 0,0056 g 0,0927 g
PROMEDIO 0,00588 g 0,09488 g
DESVIACIÓN ESTÁNDAR 0,000294958 0,002546959

COEFICIENTE DE VARIACIÓN 5,016286124% 2,684400265%

MUESTRA DE CÁLCULO
Promedio=(0,0056g+0,006g+0,0059g+0,0063g+0,0056g)/5=0,00588gVARIANZA=((0,0056-0,00588)^2+(0,006-0,00588)^2+(0,0059g-0,00588)^2+(0,0063-0,00588)^2+(0,0056-0,00588)^2)/5=0,000000087
Desviacion Estandar=√0,000000087=0,000294958
Cv=(S_x^ )/x ̅ ×100

COEFICIENTE DE VARIACION=0,000294958/0,00588×100=5,01628%
Tabla 2 Calibración de la micropipeta 1000 μL y 0100 μL
MICROPIPETA VOLUMEN MENOR VOLUMEN MAYOR
PESO 1 0,0873 0,985
PESO 2 0,0878 0,7845
PESO 3 0,0889 0,9754
PESO 4 0,0922 0,9769
PESO 5 0,08820,9833
PROMEDIO 0,08888 0,94102
DESVIACION ESTANDAR 0,001946022 0,087592391
COEFICIENTE DE VARIACION 2,18949323% 93,61962252%

MUESTRA DE CÁLCULO

Promedio=(0,0873g+0,0878g+0,0889g+0,0922g+0,0882g)/5=0,08888g
VARIANZA=((0,0873-0,08888)^2+(0,0878-0,08888)^2+(0,0889-0,08888)^2+(0,0922-0,08888)^2+(0,0882-0,08888)^2)/5=0,0000037877
Desviacion Estandar=√0,0000037877=0,001946022
Cv=(S_x^ )/x ̅×100

COEFICIENTE DE VARIACION=0,001946022/0,08888×100=2,18949323%

Tabla 3 Absorción de luz para la solución (CuSO4)
λ A λ A
350 0,049 530 0,068
370 0,019 550 0,096
390 0,013 570 0,147
410 0,043 590 0,231
430 0,042 610 0,37
450 0,045 630 0,583
470 0,045 650 0,88
490 0,047 670 1,273
510 0,053 700 1,949

GRÁFICA 1. ABSORBANCIA VS LONGITUD DE ONDA (NM) PARA EL CUSO4

Tabla 4. Datosde la dilución de la solución madre de CuSO4
TUBO VOLUMEN AGUA Ml VOLUMEN REACTIVO Ml CONCENTRACION (M) ABSORBANCIA
1-1:2 2,5 2,5 0,15 0.0993
2-1:5 4 1 0,06 0.0390
3-1:10 4,5 0,5 0,03 0.0261
4-1:50 4,9 0,1 0,006 0.037
5-1:100 4,95 0,05 0,003 0.018
SOLUCION PROBLEMA 1,231 0.638

Preparación en tubos de ensayo 5 mL, las siguientes diluciones a partir de la solución 0.3 M de CuSO4...