Endotoxinas Bacteianas

Índice


1. Objetivo 2


2. Alcance 2


3. Responsabilidades 2


4. Definiciones, Siglas y Abreviaturas 2


5. Documentación de Referencia 2


6. Frecuencia 2


7. Seguridad e Higiene 2


8. Materiales y/o equipos 2


9 Procedimiento 2


10 Control de cambios 9


11 Anexos 9

I - Distribución
II - Revisión
III - Planilla "Límite de endotoxina para Limulus testsensibilidad 0,125 EU/mg
















Objetivo

Determinar si el producto a analizar esta contaminado con endotoxinas bacterianas.


Alcance

Toda materia prima, producto intermedio o producto terminado que se declare apirógeno.


Responsabilidades

Personal de control de calidad.



Definiciones, Siglas y Abreviatura


5 Sensibilidad del reactivo λ: se define como la mínimaconcentración de endotoxina estándar expresada en EU/ml que produce un gel firme en las condiciones normales del ensayo.


6 Máxima dilución Valida MDV: es la máxima dilución permitida de la muestra en que se puede determinar el límite de endotoxinas.





Documentación de Referencia

FNA 7º


Frecuencia

Cuando se requiera.



Seguridad e Higiene

Tomar las medidas necesarias de seguridad para elcorrecto trabajo en el laboratorio, utilizar guantes, cofias, barbijos y antiparras.


Materiales y/o equipos

- Tubos apirogenos
- Tips apirogenos P200 μl y P1000 μl
- Reactivo LAL
- Endotoxina
- Baño térmico
- Elementos de seguridad
- Agua apirogena testeada
- Micropipetas automáticas


Procedimiento


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9.1. Materiales:
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1.
1. El material de vidrio se despirogena en un ciclo de estufa de 1 hora a 250ºC, o bien se utiliza material de vidrio calidad LAL con certificado.
2. Los materiales plásticos como los tips de pipetas automáticas deben ser apirógenos.
3. Encender el baño termostático, dejar que se estabilice a (37 ±1)°C durante aproximadamente 15 minutos dependiendo del nivel del agua y la temperatura ambiental.


2. Preparación de las muestras:

1. Todos los materiales que entren en contacto con la muestra deben ser apirógenos, se utilizan técnicas asépticas en todo momento. Las muestras se preparan realizando diluciones con agua apirógena, si fuera necesario se ajusta el pH de la muestra entre6.0 y 8.0 con una solución de ácido o base que pueden prepararse a partir de los sólidos o concentrados con agua apirógena en envases despirogendos.

3. Reactivos:

1. Reactivo LAL: Se utiliza la marca Cape Cod. Contiene Lisado de Amebocito, con un buffer para regulación de pH, y estabilizado por cationes monovalentes y divalentes. La sensibilidad λ, expresada en EU/ml, se define como lamínima concentración de endotoxina estándar expresada en EU/ml que produce un gel firme en las condiciones normales del ensayo.


1. Reconstitución: Colectar el polvo liofilizado del reactivo sobre el fondo del vial, mediante golpes suaves. Remover el precinto y liberar el vacío, levantando el tapón despacio, evitando tocar con los dedos la boca del vial. Rehidratar con de aguaapirógena según indicaciones del proveedor, descartar el tapón de goma, y homogenizar por rotación del liquido contra las paredes. Evitar toda agitación enérgica debido a que se desfavorecerá la formación del coagulo.


2. Almacenamiento: El reactivo liofilizado puede conservarse en heladera de 2 a 8 ºC, hasta la fecha de vencimiento. Una vez reconstituido podrá conservarse en heladera de2 a 8ºC, durante un día; o en freezer durante 1 mes. El reactivo Lal puede reconstituirse y conservarse en tubos flint (0.1 ml / tubo) en freezer durante 1 mes, pero solo podrá descongelarse 1 vez.

2. Endotoxina Estándar de Control (CSE): Es una preparación de endotoxina de Escherichia coli 055:B5 que se ha contrastado contra la endotoxina estándar de referencia (RSE) y obtener una...