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 UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICA
LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA

Grupo: 2 Práctica # 9
Fecha de la práctica: 13/12/13 Fecha de entrega: 30/12/13


1. TITULO: Concentración letal 50 (CL50).
2. OBJETIVOS
Objetivo general:
Determinar la concentración o dosisen que una sustancia química o un fármaco tiene la capacidad de causar la muerte en el 50% de individuos tratados (artemia salina- Artemia spp.) con un toxico a una concentración determinada (CL 50).

Objetivos específicos:
Realizar los cálculos de la DL50 (CL50) con el método probit.
Dejar por 24 horas las larvas de artemia salina- Artemia spp y observar los cambios.
3.- MODELOEXPERIMENTAL
1.- Especie: Larvas de artemia salina- Artemia spp
2.- Número: 50
3.- Dosis:
SUSTANCIA: Glifosato 480 g/L
1:100 (4800 mg/ml)
1:5 (960 mg/ml)
1:40 (120 mg/ml)
1:200 (24 mg/ml)
1:1000(4.8 mg/ml)
4.- Vía de administración: sistémico.
5.- Periodo: 24 horas de exposición.
6.- Biomarcadores:
Concentración
(mg/L)
Tubo 1
Tubo 2

Vivos
Muertos
Vivos
Muertos
1:100 (4800 mg/ml)Grupo 1
3
7
2
8
1:5 (960 mg/ml)
Grupo 1
8
2
5
5
1:40 (120 mg/ml)
Grupo 2
2
8
7
3
1:200 (24 mg/ml)
Grupo 3
2
8
0
10
1:1000 (4.8 mg/ml)
Grupo 4
1
9
0
10

4.- MÉTODO FUNDAMENTO.
Concentración letal media (CL50)
Es la concentración, obtenida por estadística, de una sustancia de la que puede esperarse que produzca la muerte, durante la exposición o en un plazo definidodespués de ésta, del 50% de los animales expuestos a dicha sustancia durante un periodo determinado. El valor de la CL50 se expresa en peso de sustancia por unidad de volumen de aire normal (miligramos por litro, mg/L).

La Artemia salina es un pequeño organismo que vive en las aguas salubres e hipersalinas de todo el mundo. Es la presa viva más adecuada para la alimentación de los estadiospost-larvarios de muchas especies de peces y crustáceos marinos. Y en su fase adulta resulta un aporte interesante para la multitud de invertebrados y peces que pueblan nuestro acuario. Este pequeño ser es un crustáceo de la subclase de los anostráceos y conforma el plancton de las aguas continentales salubres. (Roca, 2012)
Para medir la toxicidad de una planta, extracto o sustancia química se recurrecon frecuencia la prueba de CL50 en Artemia Salina, que no es sino un pequeño camarón de mar (crustáceo originario de la Bahía de San Francisco, cuyos nauplios (lavas) son sensibles a gran variedad de sustancias, es un organismo completo en cuanto a sistemas enzimáticos se refiere, se emplea para evaluar la toxicidad de un vegetal y también como método de comprobación de la actividad deplaguicidas, micotoxinas, toxinas de dinoflagelados y sustancias de acción farmacológica. Los huevos de la artemia salina se venden como alimentos para peces.
La actividad observada en el test con artemia salina se expresa como toxicidad a los camarones CL50, es decir la dosis que mata al 50 % de los camarones. Es un ensayo de toxicidad general. Se considera como citotóxico cuando la CL50 es igual a 1000– 2000 ppm en extractos crudos y es menor a 200 ppm en sustancias puras.
5. PROCEDIMIENTO.


























Especificaciones del Diagrama de flujo.
E1: en un recipiente de plástico hasta las 2/3 partes, dividido por una pared intermedia con un espacio en la parte baja de 2 mm; mantener en condiciones de oscuridad y oxigenación. Uno de los compartimentos semantiene iluminado con una lámpara de 100 watts
E2: colocar 1 ml de la dilución de glifosato que corresponda, previamente aclimatado a 25 °C, además preparar un blanco con 5 ml de agua de mar (Disolución 1:40)

E3: 10 nauplios en cada tubo, y completar a 6 ml con agua de mar. Total 30 nauplios por cada dilución, el volumen de agua de mar que se toma con las larvas no debe exceder 0,05mL...