Enriquecimiento de igg de raton

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“Comparación de diversas técnicas de enriquecimiento para IgG, extraída de líquido ascítico de ratón”.

ARGALUZA M. F., JULIO F., NUÑEZ D., ROJAS R.
Pontificia Universidad Católica de Valparaíso, Facultad de Ciencias Básicas y Matemáticas, Instituto de Biología, InmunologíaRESUMEN.
Las Inmunoglobulinas G (IgG) son glicoproteínas de isotipo gamma globulinas presentes en el suero y otros fluidos de mamíferos. En el presente trabajo se llevaron a cabo tres metodologías (precipitación con sulfato de amonio y la utilización de ácido caprílico y DEAE) para enriquecer IgG a partir de líquido ascítico de ratón con la finalidad de comparar cuál de ellas presenta unmayor porcentaje de rendimiento y eficiencia en la obtención de IgG. Para ello se cuantificaron proteínas totales presentes en los diferentes extractos (LA, SAS, SAP, AcS, AcP, NR y 0.05, 0.1, 0.15 y 0.25% de NaCl) usando el método de Ácido Bicinconínico (BCA). Para la cuantificación de IgG total presente en las distintas muestras mencionadas, se realizó método de ELISA, análisis que fuecomplementado con Dot Blot. Se evidenció presencia de IgG en todas las muestras y reacción cruzada con IgM. Finalmente se llevó a cabo un Western Blot, donde se identificaron las cadenas pesada y ligera de IgG de ratón presentes a 55,95 y 28,61 KDa respectivamente. A luz de los resultados obtenidos, la técnica que entrega mayores porcentajes de rendimiento es el enriquecimiento de IgG con ácido caprílico.INTRODUCCION.
Las IgG son glicoproteínas de isotipo gamma globulinas presentes en el suero y otros fluidos de los mamíferos. Son producidas por los linfocitos B de forma secretada o unida a la membrana. Estas últimas actúan como receptores que median la activación de los linfocitos B desencadenada por el antígeno. Las IgG secretadas actúan como mediadores de la inmunidad humoral específicallevando a cabo diversos mecanismos efectores para la eliminación de antígenos (1). Estas proteínas además cumplen la función de opsonización, activación del complemento e inhibición por retroalimentación de linfocitos B, entre otras (2).
Estructuralmente las IgG están formadas por cuatro cadenas: dos cadenas ligeras idénticas de 25 KDa cada una y dos cadenas pesadas idénticas de 55 KDa cada una;de tal forma que cada cadena ligera está unida covalentemente a una cadena pesada (3). Esta glicoproteína tiene un peso molecular de aproximadamente 150 KDa y su punto isoeléctrico es de 5,4 (3).
El enriquecimiento, para una posterior purificación, de IgG a partir de líquido ascítico de ratón representa una etapa de mejora inicial que puede conducir a la preparación de antisueros o anticuerposmonoclonales de múltiples utilidades en inmunología aplicada e inmunoterapéuticas (4). He allí la importancia de desarrollar una metodología experimental donde se comparen diversas técnicas de enriquecimiento, separación y purificación de IgG.
En el presente estudio se utilizó como modelo biológico ratones de laboratorio a los cuales se les administró PRISTANE (3, 3, 5, 5 tetrametil pentadecano),un compuesto que genera tumores ascíticos ricos en anticuerpos.
Es posible realizar el enriquecimiento de IgG proveniente de líquido ascítico de ratón usando diversas técnicas; en este trabajo experimental se utilizaron las técnicas: Ácido Caprílico, Sulfato de Amonio o DEAE. El ácido caprílico, también llamado octanoico, posee una cadena de ocho carbonos y es usado para enriquecer IgG mamíferosprovenientes de suero, plasma o fluidos ascíticos (5). Es sabido que el ácido caprílico es un agente precipitante efectivo para la mayoría de las proteínas plasmáticas a pH 4,8 sin afectar a IgG o IgA, siempre que estén optimizados parámetros como la temperatura y la fuerza iónica (6). Condiciones muy ácidas pueden tener un impacto negativo en la calidad, integridad y funcionalidad de las...