Ensayo De Absorbancia (280 Nm)

Ensayo de Absorbancia (280 nm)
Consideraciones para su uso
Ensayos de absorbancia son rápidos y convenientes, ya que no reactivos adicionales o incubaciones se requieren. No existe un estándar deproteínas necesitan estar preparados. El ensayo no consume las proteínas. La relación de absorbancia para la concentración de proteínas es lineal. Debido a diferentes proteínas y ácidos nucleicostienen una amplia variedad características de absorción que puede haber un error considerable, especialmente para las incógnitas o mezclas de proteínas. Cualquier componente no proteico de la solución queabsorbe la luz ultravioleta entorpecer el ensayo. Muestras de células y tejidos de fraccionamiento a menudo contienen componentes insolubles o de color que interfieren. El uso más común para elensayo de absorción es monitorear las fracciones de columnas de cromatografía, o en cualquier momento que se necesita una estimación rápida y error en la concentración de proteínas no es una preocupación.Un ensayo de absorción se recomienda para la calibración de las soluciones de suero bovino puro albúmina o proteína de otras normas para su uso como en otros métodos.
Principio
Las proteínas ensolución de absorber la luz ultravioleta con absorbancia máxima a 280 y 200 nm. Los aminoácidos con anillos aromáticos son la razón principal para el pico de absorbancia a 280 nm. Enlaces peptídicos sonlos principales responsables de la cima, a 200 nm. Estructura secundaria, terciaria y cuaternaria afectan a la absorbancia, por lo tanto, factores como el pH, fuerza iónica, etc pueden alterar elespectro de absorción.
Equipamiento
Además de manejo de líquidos estándar proporciona un espectrofotómetro con lámpara UV y la cubeta de cuarzo se requieren.
Procedimiento
Llevar a cabo los pasos 1-4(280 nm solamente) para una estimación muy aproximada. Llevar a cabo todas las medidas si la contaminación del ácido nucleico es probable.
1. Calentamiento de la lámpara UV (unos 15 min.)
2. Ajuste...