ensayo de derecho

La enzima amilasa digiere el almidón está presente en altas concentraciones en la saliva humana pero también está presente en otros tejidos y fluidos corporales humanos, aparte de la saliva, aunque normalmente a concentraciones significativamente más bajas, así como en la saliva de otros mamíferos. Por lo tanto, un resultado positivo amilasa es indicativa, no concluyente, por la saliva humana.En las investigaciones forenses, pruebas de actividad de la amilasa se ha usado para localizar manchas de saliva en las superficies por más de tres décadas. En la actualidad, un método de detección basado en las pruebas de amilasa podría ser útil para reducir el número de muestras de ADN negativos de escenas del crimen. Sin embargo, para utilizar este método algunas cosas necesitan serconsiderados. Se sabe que la actividad de la amilasa salival varía grandemente entre los individuos, y también varía un poco con el tiempo dentro de los individuos. Por otra parte, las personas tienen diferentes propensiones a eliminar las células epiteliales, que afecta a la cantidad de ADN en la saliva. La correlación entre la actividad de la amilasa y la cantidad de células / ADN en la saliva por lotanto, debe ser investigada.
La actividad de amilasa en las manchas de saliva disminuye rápidamente durante las primeras horas de secado, pero es entonces bastante estable a través del tiempo a temperatura ambiente. Por lo tanto, las pruebas de amilasa se puede utilizar para detectar una mancha de saliva seca varios meses después de la deposición..
A continuación, se midió los niveles de actividadde amilasa y determinamos las concentraciones de ADN correspondientes de saliva obtenida de 10 hombres.
Se utilizó la prueba forense Phadebas que consiste en microesferas de almidón con un colorante azul reticulado para el almidón, se inmoviliza sobre hojas de papel de filtro. En la presencia de amilasa del almidón se digiere, liberando el colorante soluble en agua, que se difunde a través de losporos del papel de filtro. El color azul resultante se observa visualmente en el lado no-reactivo del papel Phadebas
Materiales y métodos
En la pruebas, muestras de ADN con concentraciones de ADN por debajo de 0,025 ng / ml se interrumpe, debido a la baja probabilidad de obtener perfiles de ADN completos.
Los principales tipos de muestras utilizadas en este estudio fueron colillas decigarrillos y los hisopos de botellas, latas, etc
Las muestras de saliva fueron recuperados de 10 voluntarios sanos de sexo masculino, 22 a 35 años de edad, por lo menos 1 hora después de comer o beber otras bebidas que el agua. Todas las muestras se obtuvieron a las 10 horas, ya que la actividad amilasa se sabe que varían durante el día. La actividad de la amilasa se midió usando el Phadebas amilasa ,Tres repeticiones fueron analizados para cada muestra. Un mes después del primer análisis, las nuevas muestras de saliva se obtuvieron de voluntarios # 1, # 2 y # 10, y la actividad de la amilasa se volvió a medir, por triplicado. Tres repeticiones de 32 ml de saliva de cada uno de los 10 voluntarios se analizaron para la concentración de ADN,
Preparación de las manchas de saliva secaSensibilidad: Se utilizó saliva de tres de los voluntarios (con alto, intermedio y bajo actividad de amilasa, es decir, # 1, # 2 y # 10). Cuatro réplicas de 32, 8, 2 y 0,5 ml de saliva pura se distribuyeron uniformemente en zonas 2 x2 cm de la ventana de vidrio limpio.
Tres repeticiones de 32, 8, 2 y 0,5 ml de saliva (a partir de voluntarios n º 2) se distribuyeron de manera uniforme en los bordes de loscuellos de botellas de vidrio limpias. Para evitar el sesgo de análisis, el investigador no estaba al tanto de la cantidad de saliva en las botellas.
Todas las manchas de saliva se dejaron secar a temperatura ambiente durante 24 h antes del hisopado.
Hisopado
Las muestras de saliva se tomaron utilizando hisopos de algodón estériles humedecidos con 30-60 ml de solución salina estéril. Sólo la...