Ensayos

PRÁCTICA No. 3

PRUEBAS SECUNDARIAS DE IDENTIFICACIÓN BACTERIANA

OBJETIVO:
El alumno adquirirá los conocimientos y la habilidad necesarios para identificar la especie bacteriana a partir de un cultivo puro, realizando la inoculación de diferentes medios de prueba para conocer características de crecimiento, necesidades nutritivas y actividades metabólicas y bioquímicas que lacaracterizan.

INTRODUCCIÓN:
La identificación secundaria de bacterias está basada en la realización de diversas pruebas que vienen incluidas en las tablas de identificación de especie de Cowan y Steel (1979). Debido a que existen un gran número de géneros la tabla a consultar dependerá de dicho género.
Por otro lado, se le pide por favor que durante el desarrollo de la práctica depruebas secundarias utilice usted el formato que viene al finalizar la descripción de todas las pruebas, para que pueda ir asentando sus resultados allí y no se le extravíen. Se le sugiere que el llenado de la misma lo haga con lápiz, para poder corregir errores si los hubiera.
En la presente práctica llevaremos a cabo las pruebas que vienen enlistadas en la tabla 1 PS, las cuales en conjunto sonutilizadas ampliamente para la identificación de géneros y especies de enterobacterias (recuérdese que las enterobacterias son una familia de bacterias en las que excepcionalmente no se puede identificar su género en pruebas primarias). Cabe aclarar que, si usted consulta las tablas de Cowan y Steel, se va a encontrar con una mayor cantidad de pruebas que en esta práctica no se llevan a cabo debidoa falta de tiempo, materiales e infraestructura. De hecho, entre mas pruebas se realicen es mayor la probabilidad de llegar aun diagnóstico definitivo, así que nunca pierda esto de vista.
Durante esta práctica trabajaremos con medios de cultivo de prueba los cuales se trabajan en tubos de ensaye, ya sea líquidos, semisólidos ó sólidos. Recuerde usted que en cada caso, la inoculación de losmedios es diferente de acuerdo a su contenido de agar. Los medios líquidos se inocularán por agitación con asa de filamento redondo, los semisólidos por picadura con asa de filamento recto, pues en ellos se evaluará la motilidad, y los sólidos por picadura al fondo y estría en la superficie, en este último caso, sobre todo si en la prueba respectiva se requiere propiciar cierta condición anaerobiapara la utilización de un sustrato determinado. Por ejemplo en la prueba de Citrato el medio suele ser sembrado solamente por estriado en la superficie, porque la reacción no requiere de anaerobiosis, mientras que en el caso de TSI se requieren condiciones aerobias (pico de flauta) y anaerobias (fondo).
Es importante recordar que durante la inoculación de cada medio es necesario poner cuidado en elflameado y enfriamiento del asa antes de tomar el centro de una colonia bacteriana. Si no tomamos en cuenta esta medida la bacteria podría no crecer en los medios porque se “quemó”. Si se quemó no crecerá.
Durante la lectura de cada prueba también debe recordarse el hecho de verificar la presencia de crecimiento sobre los medios. Si la bacteria no creció, no podremos leer esa prueba.
Algoimportante de recordar es que aquellas pruebas bioquímicas cuyos medios no contienen un indicador de pH requieren de la adición de reactivos de lectura. Por lo tanto, revise con cuidado su manual para la interpretar cada una de las pruebas.
Como puede observar usted en la tabla 1PS, las pruebas bioquímicas secundarias se dividen en dos grandes grupos principalmente:
1. Pruebas simples.-Reciben su nombre porque en los medios utilizados solo se evaluará la actividad bacteriana sobre un sustrato específico y por lo tanto solo se obtiene un resultado a partir de ellas (por lo general).


2. Pruebas múltiples.- En estas, la actividad bacteriana se evalúa sobre dos o más sustratos y por lo tanto se obtienen varios resultados diferentes, mismos que deberán describirse sin omisiones....