Enzima Amilasa

Objetivos de la práctica:
* Comprobar la actividad catalítica de la amilasa en suero.
* Aplicar la técnica de Caraway modificada en la cuantificación de amilasa en suero.
* Analizar la importancia de la determinación de enzimas en el diagnostico clínico.
Reactivos:
* Sustrato reactivo de almidón pH 7.0
* Reactivo de yodo N/100= Reactivo de I2/IK= reactivo de lugol

Muestrabiológica:
* Suero

Material:
* 2 frascos volumétricos de 50 mL
* 1 pipeta serológica de 0.1 mL o 0.2 mL
* 2 pipetas serológicas de 5 mL
* 1 gotero

Equipo:
* Centrifuga
* Baño de María
* Espectrofotómetro

Procedimiento:
1. Prepare dos frascos volumétricos de 50 mL y rotule adecuadamente problema y control.
2. Transfiera 5.0 mL de sustrato (almidón)a cada uno de los frascos volumétricos
3. Incube el frasco “problema” en un baño de María a 37°C por 5 minutos; el control no necesita incubación
4. Coloque 0.10 mL de suero en el frasco problema, mezcle bien y colóquelo de nuevo en el baño de María por exactamente 7 ½ minutos NOTA: Evite contaminación de la muestra con saliva
5. Después de los 7 y medio minutos extraiga, el frasco“problema” del baño; inmediatamente adicione 5.0 mL de reactivo de yodo N/100 en ambos frascos y afore a 50 mL con agua destilada, mezcle bien por inversión o rotación.
6. Mida en un espectrofotómetro la absorbancia (A) del problema y de control a una longitud de onda de 660 nm. Llevar a cero con agua destilada en cada caso.

Preguntas:
1. ¿Observa alguna diferencia de color en el frascoproblema y el frasco control, después de incubar 7 y medio minutos y mezclar?

2. Explique a que se debe la diferencia

3. ¿Cuál es la función del reactivo de Lugol en esta practica?

4. Explique que representa para la amilasa [3.2.1.1]

5. ¿en que patologías suele indicarse la determinación de amilasa sérica?

6. Si se utiliza plasma como muestra biológica, losanticoagulantes que presentan interferencia en la determinación son…

CALCULO:

Absorbancia de control – Absorbancia de Problema x 800 = Unidades de Amilasa/dL
Absorbancia de control

Resumen bibliográfico
Propiedades generales de las enzimas y que es amilasa

Las reacciones químicas se realizan en los seres vivos a gran velocidad, en condiciones muy moderadas de temperatura, pH, presión, etc.,gracias a la existencia de catalizadores denominados enzimas.  Las enzimas se caracterizan por su notable eficiencia y su extraordinaria especificidad.
      La gran mayoría de las enzimas son proteínas, también existe ARN con actividad catalítica (ribozimas). Algunas enzimas son proteínas simples y otras, proteínas conjugadas asociadas con otra molécula no proteica, de pequeño tamaño, la coenzimao cofactor. En función de su naturaleza se denominan:
1. Cofactor. Cuando se trata de iones o moléculas inorgánicas. (Cofactores). Algunos cofactores entran a formar parte del sitio activo y son integrantes de la proteína enzima (metaloproteínas); otros al parecer, establecen un enlace entre la enzima y el sustrato.
2. Coenzima. Cuando es una molécula orgánica. Aquí se puede señalar, quemuchas vitaminas funcionan como coenzimas; y realmente las deficiencias producidas por la falta de vitaminas responde más bien a que no se puede sintetizar una determinada enzima en el que la vitamina es la coenzima.

Entre las coenzimas mas comunes encontramos:
Nombre | Vitamina correspondiente |
Pirofosfato de tiamina | TIAMINA |
Fosfato de piridoxal | PIRIDOXINA |
Biotina | BIOTINA |Flavina adenina mononucleótido  (FMN) | RIBOFLAVINA |
Flavina adenina dinucleótido (FAD) | RIBOFLAVINA |
Nicotinamida adenina dinucleótido (NAD) | NICOTINAMIDA |
Nicotinamida adenina dinucleótido fosfato (NADP) | NICOTINAMIDA |
Coenzima A | ACIDO PANTOTÉNICO |
Acido tetrahidrofólico | ACIDO FÓLICO |
Coenzima B12 | VITAMINA B12 |

La International Union of Biochemists (IUB)...