ENZIMA SUSTRATO

ENZIMA SUSTRATO COLIFORMES TEST
INTRODUCCIÓN
La prueba de sustrato de enzima utiliza sustratos hidrolizables para la detección simultánea de bacterias coliformes totales y enzimas Escherichia coli. Cuando la técnica de la enzima se utiliza, el grupo de coliformes totales se define como todas las bacterias que poseen la enzima beta-D-galactosidasa, que escinde el sustrato cromogénico, lo queresulta en la liberación del cromógeno. Escherichia coli se definen como bacterias dando una respuesta positiva de coliformes totales y que posee la enzima beta-glucoronidasa, que escinde un sustrato fluorogénico, resuting en la liberación del fluorógeno. La prueba se puede utilizar ya sea en una de tubos múltiples, multi.well, o una presencia-ausencia (single-ml de muestra) formato.
1 – PRINCIPIO:a) Las bacterias coliformes totales: sustratos cromogénicos, tales como orto-nitrofenil-beta-D-galactopiranósido (ONPG) o rojo de clorofenol-beta-D-galactopiranósido (CPRG), se utilizan para detectar la enzima beta-D-galactosidasa, que es producida por bacterias coliformes totales. La enzima beta-D-galactosidasa hidroliza el sustrato y produce un cambio de color, lo que indica una prueba positvepara coliformes totales a las 24 horas (ONPG), o 28 horas (CPRG) sin procedimientos adicionales. Noncoliform bacterias como Aeromonas y especies de Pseudomonas, puede producir pequeñas cantidades de la enzima beta-D-galactosidasa, pero son suprimidas y generalmente no produce una respuesta positiva en el tiempo de incubación menos que más de 104 unidades formadoras de colonias (CFU) / ml (106UFC/100 ml) están presentes.
b) de Escherichia coli: un sustrato fluorogénico, tal como 4-metilumbeliferil-beta-glucuronidasa, la cual es producida por E. coli. La enzima hidroliza beta-glucuronidasa el sustrato y produce un producto fluorescente whwn se observa bajo la longitud de onda larga (366 nm) ultravioleta (UV). La presencia de fluorescencia indica un resultado positivo para E. coli. Algunascepas de Shigella spp. También pueden producir una respuesta de fluorescencia positiva. Debido a que Shigella spp. son evidentes patógenos humanos, esto no se considera una dentment para probar la calidad sanitaria de agua.
2.- APLICACIONES
El sustrato de la enzima coliforme prueba se recomienda para el análisis de muestras potable y agua de origen. Las formulaciones también están disponiblespara el análisis de aguas marinas THR. Inicialmente, los laboratorios que planean utilizar este procedimiento debe llevar a cabo las pruebas en paralelo cuantitativa (incluidas las variaciones estacionales), con una de las pruebas estándar de coliformes para evaluar la efectividad de la prueba para el tipo de agua ESPECÍFICO siendo analizados y determinar la comparabilidad de las dos técnicas. Estoes particularmente importante cuando se prueban las aguas de origen.
Las muestras de agua que contienen material húmico o de otro tipo pueden ser de color. Si hay color de fondo, comparar inocularon otro a un tubo de control que contiene muestra de agua solamente. En cierta agua, alto contenido de sal de calcio puede causar la precipitación, pero esto no debe afectar a la reacción.
No utilice laprueba de sustrato de la enzima para verificar presuntivos culturas coliformes o colonias de filtro de membrana, porque el sustrato puede ser sobrecargado por el inóculo pesado de débiles beta-D-galactosidasa productoras de noncoliforms, causando resultados falsos positivos.

ENZIMA SUSTRATO DE PRUEBA
1 -. MEDIOS DE SUSTRATO
Formulación están disponibles comercialmente en tubos desechablespara el procedimiento de tubos múltiples, en desechables de múltiples pocillos para el procedimiento así múltiples, o en contenedores que tienen muestras de 100 ml para el enfoque de presencia-ausencia. Apropiadas porciones previamente pesadas del reactivo para mezclar y dispensar para 100-ml muestras también están disponibles. La necesidad de garantizar la buena calidad y la uniformidad requiere...