Enzimas de restricción, solubles y particuladas

Enzimas de restricción: son endonucleasas producidas por las bacterias que reconocen secuencias específicas de 4 a 8 pares de bases, denominados sitios de restricción y luego escinden ambas hebrasde DNA en este sitio. Los sitios de restricción comúnmente son secuencias palidrómicas cortas, es decir la secuencia sitio de restricción es la misma sobre cada hebra de DNA cuando se lee direccións´→3´

Para cada enzima de restricción, la bacteria produce también una enzima de medificación (metilación), que protege al propio DNA bacteriana d la escición, esta adiciona un grupo metilo a una o dosbases, casi siempre del sitio de restricción.

Muchas enzimas de restricción realizan cortes escalonados en las dos hebras de DNA en sus sitios de restricción y generan fragmentos que tienen una“cola” de hebra simple en ambos extremos; estas regiones se denominan extremos adhesivos.

Enzimas como AlaI y SmaI, escinde ambas hebras de DNA en sus sitios de restricción y generan fragmentos conextremos romos en los cuales todos los nucleótidos en los fragmentos del fragmento están apareados por su base a los nucleótidos de la hebra complementaria.

Una enzima de restricción determinadacortará el DNA de una fuente particular en un grupo de fragmentos reproducibles denominados fragmentos de restricción.

Enzimas Solubles: Solución

Incluyen proteínas tetraméricas con capacidad dereducir el NAD⁺

Se encuentran en fluidos biológicos, citosolcelular, lisosomas, vacuolas, estroma del cloroplasto.

En la purificación permanecen en el sobrenadante luego de la eliminación delos componentes particulados. La ruptura de las células en un buffer adecuado libera tales enzimas al medio.

Ejemplo:

Alanina Aminotransferasa

Deshidrgenasa Lactina

Aldolasa

Enzimasparticuladas:

Incluyen enzimas diméricas que transfieren los electrones del hidrógeno directamente a la cadena respiratoria, a nivel de la quinona, se encuentran en las membranas plamáticas,...