Enzimas de restriccion

Acción de la enzima de
restricción EcoRI
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Nucleic Acids Res. 2001 September 15; 29(18): 3705–3727.Structure and function of type II restriction endonucleases

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Endonucleasas de restricción Tipo II

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Endonucleasas de restricción TipoII

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Eco RI: Model image of the restriction enzyme ECO RI (red and yellow) binding to DNA
(blue). The enzyme is made up of two S Lobos C - U de Chileunits thatcorrespond to the double
symmetrical
helix structure of DNA.

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Frecuencias de corte por ER
(en un DNA 50 %GC)
La mayoría de las ER reconocen secuencias de
entre 4 y 6 pb.
pb.
La probabilidadque se encuentre una secuencia
de 4 nt en el DNA es:
([1/4]4) = 1 en 256 pb.
pb.
Una secuencia de 6 nt = ([1/4]6) = 1 en 4.096 pb.
pb.
Otras ER reconocen secuencias más largas
(hasta 8 pb). Unsitio de reconocimiento de 8 pb
pb).
ocurrirá con una frecuencia de aproximadamente
fr
1 en 65.536 bases ([1/4]8). Ej. NotI

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Frecuencias de corte en ER’s
Corte Frecuente

Sitio

CorteInfrecuente Sitio

Sau3AI

GATC\

EcoRI

G\AATTC

TaqI

T\CGA

NotI

GC\GGCCGC

HaeIII

GG\CC

BamHI

G\GATCC

Nt.CviPII

\CCD

BcgI

CGANNNNNN\TGC

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Ligación de
fragmentos de
restricción con
extremos cohesivos
v/s
Ligación de
extremos romos

DNA I + DNA II

T4 DNA li
ligasa

ATP

DNA recombinante

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Otros enzimas

Metilasas
Nucleasas
F f
Fosfatasas
Polimerasas
Transcriptasa inversa
p
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DNA pol I de E. coliFragmento Klenow

Klenow H and Henningsen I "Selective Elimination
of the Exonuclease Activity of the Deoxyribonucleic
Acid Polymerase from Escherichia coli B by Limited
Proteolysis" Proc Natl...