enzimas de restriccion

GRUPO 1: ENZIMAS DE RESTRICCIÓN

En 1975 Daniel Nathans y Hamilton Smith descubrieron unas proteínas enzimáticas de tipo endonucleasas o Enzimas de restricción que actúan como “tijeras moleculares”, cortando la doble cadena de ADN. El descubrimiento de estas enzimas condujo a dichos microbiólogos al Nobel en 1978 y dio origen a la Ingeniería genética. Las enzimas de restricción reconocen unasecuencia especifica en la doble cadena de ADN (palindromica) y se unen a ella, luego la cortan (clivan o hidrolizan) por los enlaces fosfodiéster que la unen sin dañar la bases. Las enzimas de restricción son producidas por bacterias como mecanismo de defensa contra virus y para degradar el ADN extraño. Las enzimas de restricción reciben su nombre de acuerdo a la bacteria de la que fueron aisladaspor ejemplo:
EcoR I (de Escherichia coli)
Alu I (Arthrobacter luteus)
Taq I (Thermus acuaticus)

TIPOS DE ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Tipo I El corte no ocurre en el sitio de reconocimiento, sino que es al azar y en sitios distantes.
Tipo II La restricción ocurre en el sitio de reconocimiento ó adyacente. Estas enzimas son las utilizadas en genética molecular puesto que permiten romper el ADNen sitios específicos. Las secuencias de reconocimiento son de tipo palíndrome (se leen igual de izquierda a derecha que de derecha a izquierda) de DNA de 4 o 6 pb, son más de 2300.
Tipo III Cliva en sitios al azar, 25-27 bp más allá del sitio de reconocimiento.
Una unidad de enzima se define como la cantidad de la misma que se necesita para cortar 1µg de DNA en 1 hora.REFERENTES:
Hartl and Jones. Genetics Principles and analysis. Jones and Bartlett Publishers, 1998.
Alberts B. Biologia cellular y molecular. Barcelona 1996.

GRUPO 2: TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE
ADN recombinante esuna molécula que proviene de la unión artificial de dos fragmentos de ADN (cortados con la misma enzima de restricción) provenientes de organismos diferentes y unidos por sus extremos cohesivos por la acción de la enzima ligasa. La tecnología de ADN recombinante es el conjunto de técnicas que permiten aislar un gen de un organismo, para su posterior manipulación e inserción en otro organismodiferente. De esta manera podemos hacer que un organismo (animal, vegetal, bacteria, hongo) o un virus produzca una proteína que le sea totalmente extraña. Para introducir el ADN recombínate en una célula huésped se usan los Vectores o vehículos que le permiten entrar y replicarse. Los vectores son, esencialmente, moléculas de ADN transportadoras, con las siguientes características:
Debe tener unorigen de replicación para duplicarse junto con el segmento de ADN que transporta.
Debe contener algunos sitios de corte para enzimas de restricción, presentes sólo una vez en el vector. Estos sitios de restricción se cortan con una enzima de restricción y se utilizan para insertar segmentos de DNA cortados con la misma enzima.
Debe tener algún marcador de selección (normalmente genes de resistenciaa antibióticos o genes de enzimas que la célula huésped no tiene) para poder distinguir las células huésped que transportan el vector de las que no lo contienen.
Actualmente se utilizan tres tipos principales de vectores: los plásmidos, los bacteriófagos y los cósmidos.

El ADN recombinante se introduce enun plásmido que le sirve de vector, para entrarlo en una bacteria que se multiplica y da origen a una colonia; generando múltiples copias del ADN recombinante. Esta técnica lleva el nombre de clonación y sus etapas son:
Generación de fragmentos utilizando unas enzimas de restricción (Cortamos el ADN circular del plásmido y el ADN que queremos multiplicar)
Debemos asegurarnos de que los...