enzimas









INFORME DE LABORATORIO

Enzimología
Bioquímica





Integrantes:

Ruth Arancibia H.
Daniela Lizana M.

Docente:
Jocelyn Álvarez






13 de mayo de 2013
Introducción
Las enzimas son generalmente proteínas globulares que cumplen la función de ser biocatalizadoras proteicas, para mantener los procesos metabólicos a mayor rapidez,
Estas enzimas puedeverse alterado por cambios de temperatura y pH ya que tenemos que saber, que las enzimas tienes una temperatura optima que es de 35 a 40 °C y que en temperaturas mayores produce una desnaturalización.
Para poder medir la actividad enzimática necesitamos de la presencia de tampones o amortiguadores de pH . Por lo que en este laboratorio haremos actividades con el fin de estudiar el efecto de lasvariaciones de pH y temperatura sobre una enzima llamada amilasa salival
Objetivos:
Buena utilización de las muestras biológicas y manejo de estas
Aplicar el proceso de hidrólisis enzimática al almidón para determinar qué actividad tiene la enzima sobre este.
Reconocer los factores que afectan en la actividad enzimática. Temperatura y pH.

Procedimiento experimental
• Efecto de latemperatura sobre la hidrolisis enzimática del almidón:

En este procedimiento se requirió la utilización de seis tubos de ensayo colocados en la gradilla rotulados del uno al seis donde las soluciones fueron agregadas a cada uno de ellos: NaCl 0.9% p/v – Tampón fosfato pH7.9 – Almidón 1%p/v y preparación enzimática (lavado bucal filtrado) según lo indica la siguiente tabla:

Tubos
1
2
3
4
5NaCl 0.9% p/v
1ml
1ml
1ml
1ml
3ml
Tampón fosfato pH 7.0
1ml
1ml
1ml
1ml
1ml
Almidón 1% p/v
2ml
2ml
2ml
2ml
2ml
Preparación enzimática
2ml
2ml
2ml
2ml
-
Incubar
0°C
100°C
25°C
37°C
37°C
Luego como indica la tabla cada tubo debió ser incubado a distintas temperaturas cada uno y al cabo de 15 minutos agregamos 1 gota de lugol, se debió mezclar y observar losresultados.

• Efecto del pH sobre la actividad de la amilasa salival:

Se requirieron cuatro tubos de ensayo colocados en una gradilla rotulados del uno al cuatro, luego se le agregó distintas soluciones a cada uno de los tubos NaCl 0,9%p/v – Tampón fosfato(1ml) – Almidón 1%p/v y preparación enzimática (lavado bucal filtrado), según lo se requería en la siguiente tabla:

Tubo
1
2
3
4
NaCl0,9% p/v
1ml
1ml
1ml
1ml
Tampón fosfato (1ml)
pH 4
pH7
pH10
pH10
Almidón 1% p/v
2ml
2ml
2ml
2ml
Preparación enzimática
2ml
2ml
2ml
-
Luego de agregar las soluciones correspondientes a cada tubo de ensayo se debió esperar 15 min. Aproximadamente dejando a temperatura ambiente, después de transcurrido este tiempo se debió agregar 1 gota de lugol mezclar y observar losresultados.
Resultados

• Efecto de la temperatura sobre la hidrolisis enzimática del almidón:

En este primer experimento tenemos 5 tubos con distintas temperaturas
Observamos que el tubo 2 era el único con coloración azul (almidón con iodo) gracias a la temperatura que se ocupó que fue de 100 °C
Las otras temperaturas presentan una coloración verde que escaracterística solo de iodo
El tubo 5 se observa con un color café este no contiene amilasa salival por lo que es solo para preparar el color.


• Efecto del pH sobre la actividad de la amilasa salival:

En este segundo experimento tenemos 4 tubos con sus soluciones a distinto pH, debimos fijarnos si existía reacción entre el almidón y lugol lo cual se caracteriza por el color azul intensoObservamos coloraciones distintas y ninguna nos dio el color indicado anteriormente.
Nos fijamos que el tubo 4 (ph10) no tiene amilasa salival, por lo que es la más oscura que pese de haber agregado el almidón ninguno de ellos genera la coloración azul característica de la reacción de lugol con almidón.



Discusión

En el primer procedimiento de efecto de la temperatura...