Enzimas

ELECTROFORESIS DE PROTEINAS EN SUERO

Sofía De Arrigunaga Palacios, Laura Crespo Ortega, Alejandra Garza Villaseñor, Jenifer Jael Trejo Guerra, Miriam Turquie Ortiz
Dr. Francisco Javier Estrada
Laboratorio de Bioquímica, Escuela de Medicina, Universidad Panamericana
Palabras clave: electrophoresis, SDS , suero

Resumen:
Se realizó electroforesis en 3 muestras con concentraciones desuero ascendentes utilizando el método de SDS y gel de poliacrilamida. El colorante que se utilizó para la tinción de las muestra fue azul de Coomassie, y se dejaron las muestras en el colorante, posterior a la electroforesis, por 20 minutos. Las muestras no corrieron bien, y se hipotetizó que era debido o a una concentración demasiado alta de las muestras, o a una concentración muy elevada decolorante.

Introducción:

Las proteínas son moléculas cuya carga neta depende del contenido de una serie de aminoácidos (fundamentalmente ácido glutámico, ácido aspártico, lisina, arginina e histidina) y el grado de ionización de estos al pH considerado (1).

Se denomina electroforesis a la técnica mediante la cual se separan las biomoléculas en disolución cuando se ven sometidas a un campoeléctrico. Cada molécula se desplaza por efecto del campo, alcanzando rápidamente una velocidad constante al equilibrarse la fuerza impulsora(2).
Los geles de poliacrilamida constituyen un excelente medio de soporte para separaciones electroforéticas, dado que reúnen una serie de propiedades idóneas como son: la transparencia, elasticidad, porosidad controlable, químicamente inertes, estables en unamplio rango de pH’s, temperatura, fuerza iónica y compatibilidad con una gran variedad de compuestos químicos. La poliacrilamida se forma por copolimerización de dos compuestos: la acrilamida y la bis-acrilamida (N,N'-metilén-bis-acrilamida), en una reacción iniciada por la tetrametiletiléndiamina (TEMED) y el persulfato de amonio.

Entre las diversas técnicas de electroforesis en gel depoliacrilamida (PAGE, por sus siglas en inglés "polyacrylamide gel electrophoresis"), probablemente la más utilizada es la modalidad que se lleva a cabo en presencia del detergente duodecilsulfato de sodio (SDS-PAGE). En esta técnica se mezclan las proteínas con el detergente aniónico SDS para formar complejos desnaturalizados, cargados negativamente. La cantidad de SDS unido a las proteínas esproporcional a su tamaño; el SDS se une en una proporción aproximada de 1,4 g SDS/g proteína. Los complejos proteína-SDS poseen una estructura elipsoide o de bastón, donde la cadena proteica es distendida y solubilizada por el detergente. Dado que la relación final
carga/masa queda constante para las distintas proteínas (se anula su carga intrínseca), estas van a ser separadas en el gel porosofundamentalmente con base en sus diferencias de peso molecular (PM): a menor tamaño, mayor movilidad de la proteína, y viceversa (2).


Imagen 2. Método de electroforesis.

Una electroforesis nativa es la que somete a las proteínas a migración sin desnaturalización. En esta situación las proteínas migran en función de su carga, de su tamaño y de su forma. Además se mantienen en ciertos casos lasinteracciones entre subunidades y entre proteínas, separándose los complejos. (3).

Zimograma, conjunto de bandas pertenecientes al mismo sistema enzimático que se observan en el mismo individuo (4).

El objetivo de esta práctica consistió en elaborar una electroforesis utilizando muestras de suero. Esto con el fin de analizar la presecia de diversas proteinnas que en las práctica médica nos puedenserver como indicadores de diversas patologías.




Materiales y Métodos:

Para esta práctica se utilizo un método de electroforesis de SDS y gel de poliacrilamida. Previo a la preparación de las muestras es necesario preparar un gel de poliacrilamida y colocarlo entre las tablas de vidrio de la maquina de electroforesis. Para esta practica, este paso fue previamente preparado por los...