Enzimiologia

TEMA-22.

ASPECTOS CLÍNICOS DE LA ENZIMOLOGÍA

1. Determinación de actividades enzimáticas para el diagnostico clínico
Mejor conocimiento molecular metabolismo Desarrollo de métodos de análisis enzimáticas

2. Herramientas analíticas
Purificación de enzimas

3. Terapia enzimática
Industria Biotecnológica

8. Inhibidores enzimáticos (Fármacos)
Conocimiento estructural y funcional1. Determinación de actividades enzimáticas para el diagnostico clínico a) La enzima debe estar presente en fluido biológico b) La enzima debe ser fácil de ensayar y automatizar la medida c) Los valores de actividad entre individuos sanos y enfermos deben ser significativos y debe haber buena correlación con los valores patológicos. d) La enzima debe ser estable

Tipos de fluidos:

Suero (Máscomún) y Orina

LCF, Pleura, Sinovial, etc

SUERO
1. Enzimas específicas
Enzimas su función radica en el plasma Ej Enzimas de la coagulación, activación del complemento, metabolismo de lipoproteínas, etc

2. Enzimas no específicas
Enzimas que son secretadas por los tejidos. Ej. Amilasas, lipasas, fosfatasas, etc. Enzimas intracelulares. Daño Tisular Creatin quinasa 50.000 veces daño enel musculo. Proliferación Celular (Neoplasia) Aclaramiento renal deficiente

DIAGNOSTICO

Enzima específica de tejidos (Raro) -Abundancia relativa
Fosfatasa ácida (prostata), Acetilcolinesterasa (eritrocitos)

- Patrón de enzimas característico - Isoenzimas (LDH, Creatin quinasa..

Ciencia forense:, Adenosina deaminasa, adenilato ciclasa, aminopeptidasa, fosfatasa ácida, etc.ENZIMOLOGIA CLÍNICA DEL INFARTO DE MIOCARDIO
Pruebas enzimáticas : Evidencia de la producción de un infarto Seguimiento del progreso y la recuperación tras cirugía

Creatina Quinasa Aspartato aminotransferasa Lactato deshidrogenasa
Valor en plasma Concentración en tejido Velocidad del vertido Grado de degradación

Vida media 10 –130 horas

Creatina Quinasa mas específica

Test depende deltiempo del infarto

LDH se puede diferenciar por electroforesis

Creatina quinasa

Músculo esquelético Músculo cardiaco (Mayor concentración) Cerebro No en el hígado Proteína dimérica: Hay dos tipos de monómeros M y B Músculo M-M (99%) y M-B (1%) Corazón MM (80-70%) y M-B (20-30%) Cerebro B-B (100%) M-B (Actividad Total apenas cambia) Inmunoblotting (B)

Pequeño Infarto

Lactatodeshidrogenasa
Hígado, Corazón Inmunoblotting LDH-1 Uso de sustratos específicos

LDH1/LDH2 = 0.85 Normal >1 Enfermo

Transaminasas (ALT y AST)
Se utilizan poco actualmente Hígado AST/ALT (3-5) Corazón AST/ALT (20-25)

ENZIMOLOGIA CLÍNICA DE ENFERMEDADES HEPÁTICAS
Aspartato aminotransferasa (AST ó GOT) Alanina aminotransferasa (AST ó GPT) Fosfatasa alcalina γ-Glutamil transferasa Otras: Lactatodeshidrogenasa, glutation transferasa, etc Transaminasas

Fosfatasa alcalina
4-nitrofenil fosfato Visible

γ-Glutamil transferasa

Enfermedades hepáticas
Crónicas Agúdas Intermitentes

Hepatitis Cirrosis Tumores Obstrucción del conducto biliar

USO DE LAS PRUEBAS ENZIMOLÓGICAS -Diagnóstico de enfermedades -Seguimiento de tratamientos con fármacos (Higado metaboliza drogas) -Seguimientode operaciones hepáticas TRANSAMINASAS
No específicas del plasma Células parenquimales Hepatitis, cirrosis Necroticas (Hepatitis, cirrosis) Progreso de la enfermedad Vertido al plasma

FOSFATASA ALCALINA
No específicas del plasma Superficie sinusoidal del células hepáticas y del conducto biliar, Osteoblastos ISOENZIMAS Daños en las células del conducto biliar Ratio Fosf.Alc/TransaminasasHepatitis 0,2-0,6 Obstrucción del 10-20 conducto biliar

γ-GLUTAMIL TRANSFERASA Alcoholismo crónico Cirrosis

Incremento síntesis y en la secreción GLUTATION TRANSFERASA
Cataliza reacciones de destoxificación utilizando glutation Carcinogénicos Agentes de quimioterapia Paracetamol Xenobióticos

Contenido alto 5% Vida media corta 90 min Marcador muy rápido y sensible de daño hepático

Tiempo...