enzimologia

Objetivos:
- Conocer las propiedades de las enzimas, a través del estudio cinético de estas, utilizando métodos de espectrofotometría
- Utilizar curvas de calibración para obtener valores necesarios, a partir de la absorbancia.
- Verificar el efecto de inhibidores sobre los parámetros cinéticos de una enzima.Resultados.
A.- calibración de sustrato p- nitrofenol.

Figura 1: Curva de calibración de p- nitrofenol.
Observaciones: relación lineal de la absorbancia de p-nitrofenol con los uM de producto.
B.- determinación de los parámetros cinéticos de la fosfatasa ácida de germen de trigo y el efecto de fosfato en la reacción.













Tabla 2:
Absorbancia uMol productouMol real V0 [S]
0.05 0.208 1.04 0.0208 0
0.436 1.853 9.27 0.1853 0.25
0.714 3.038 15.19 0.3038 0.5
0.802 3.413 17.07 0.3413 0.75
0.895 3.809 19.04 0.3089 1
0.02 0.080 0.4 0.0080 0
0.257 1.090 5.45 0.1090 0.25
0.297 1.260 6.3 0.1260 0.5
0.220 0.932 4.66 0.0932 0.75
0.466 1.981 9.905 0.1981 1
Observaciones: se observó que al aumentar los uM de producto aumenta la absorbancia.Discusión.
Las enzimas son polímeros biológicos que catalizan las reacciones químicas que hacen posible la vida tal como la conocemos. La presencia y el mantenimiento de un conjunto completo y equilibrado de enzimas son esenciales para la desintegración de nutrientes para proporcionar energía y bloques de construcción química, su impresionante actividad catalítica,especificidad para sustrato y estereoespecificidad permiten a las enzimas desempeñar funciones claves en otros procesos bioquímicos, para que las moléculas reaccionen, deben acercarse hasta ubicarse dentro de la distancia formadora de enlace de otra. Mientras más alta sea su concentración, con mayor frecuencia se encontrarán una con otra y mayor será el índice de su reacción (2.b) La valoración de enzimas esmas difícil cuando sus reacciones no se acompañan de un cambio de la absorbancia o de fluorescencia, en ocasiones es posible transformar el producto o el sustrato restante en un compuesto que se detecta con mayor facilidad, consecuencia que se efectuó en el laboratorio, cuando gracias a la tabla de absorbancia-moles producto, era necesario medir velocidad y color porque los radicales no se veían.(4)
El p nitrofenilo fosfato, es un sustrato artificial para ciertas fosfatasa y quimotripsina, que no absorbe luz visible, pero después de la hidrólisis, el anión p nitrofenilato resultante absorbe luz a 419nm en las mediciones de índices de reacciones catalizadas por enzima se emplean periodos que condicionan la velocidad inicial, se acumulan trazas de producto lo que hace insignificante alíndice de la reacción inversa . la medición de V inicial permite estimar la cantidad de enzimas presente en una muestra biológica. (4) Los cambios de los índices de reacciones catalizadas por enzima que acompañan a un aumento o disminución de la temperatura presente en el experimento
Para la enzima a medida que la concentración de sustrato aumenta Vi, se incrementa hasta que alcanza Vmax, hastacuando la enzima esta saturada con sustrato.
(1.a)Los gráficos de doble reciproco facilitan la evaluación de inhibidores competitivos y no competitivos, la Vi se determina a varias concentraciones de sustrato tanto en presencia como en ausencia de inhibidor. (4) la magnitud y el significado real de Vmax y de km son parámetros que se pueden obtener en este experimento para cualquier enzima, Lacinética permite comparar las eficacias catalíticas de las enzimas.
V0 aumenta casi linealmente con el incremento de [S]. a mayores concentraciones se sustrato, v0 aumenta a incrementos cada vez menores en respuesta a incrementos de [S] finalmente, se alcanza un punto mas allá del cual se dan incrementos muy pequeños de v0 a medida que aumenta [S], esta meseta es la V max, en la actividad 1, La...