epectrometro


1. ¿CUALES SON LAS TECNICAS ESPECTROMÉTRICAS QUE SE UTILIZAN EN BIOQUIMICA CLINICA?
Las técnicas espectrométricas se basan en la interacción de las radiaciones electromagnéticas con la materia.
Existen diferentes técnicas que son:
Espectrofotometría de Absorción Molecular
Fluorimetría
Quimioluminiscencia
Espectrofotometría de Absorción Atómica
Fotometría de Llama
Nefelometría yTurbidimetría
Espectrometría de Masas
Refractometría

Las principales técnicas espectrométricas empleadas en la actualidad en los laboratorios de bioquímica clínica son:
La Fluorimetría
La Turbidimetría
La nefelometría
La luminometría
La espectrometría de absorción atómica
La espectrometría de emisión atómica

A. ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN MOLECULAR:
La espectrofotometría deabsorción molecular consiste en la medición de la radiación que llega a un detector tras producirse un fenómeno de absorción de luz por parte de una sustancia absorbente.
En química clínica, el material en estudio es generalmente una solución, y las medidas se hacen ordinariamente dentro del espectro comprendido entre los 220 y 800 nm. Es aplicable tanto para análisis cualitativos como cuantitativos.
B.FLUORIMETRÍA
El fenómeno de fluorescencia se encuentra dentro de los fenómenos llamados de “luminiscencia” que incluye además de éste, la fosforescencia y la quimioluminiscencia. Todos ellos son resultantes de la interacción de la luz con la materia que acaba con “emisión” de energía radiante.
Según el tipo de energía absorbida por la molécula, se pueden clasificar los distintos fenómenosluminiscentes en:
Fotoluminiscencia: cuando la fuente de excitación electrónica es una radiación luminosa; son fenómenos de este tipo la fluorescencia y la fosforescencia.
Quimioluminiscencia: cuando es una reacción química la que produce la energía capaz de excitar la molécula.
Existen otros tipos de luminiscencia como son: bioluminiscencia, termoluminiscencia, radio luminiscencia etc.
Los tipos deluminiscencia que tienen mayor aplicación en bioquímica clínica son la fluorescencia y la quimioluminiscencia.
La fluorescencia se produce cuando una molécula absorbe luz (longitud de onda de excitación), pasa a un estado excitado y al retornar a su estado fundamental, emite luz (longitud de onda de emisión); la fluorescencia será por tanto la emisión de esa radiación. La energía de la radiaciónemitida es menor y por tanto, la longitud de onda es mayor que la de la radiación absorbida. La diferencia o aumento entre estas 2 longitudes de onda se denomina desviación de Stokes y, de forma general, los mejores resultados de las medidas de fluorescencia se obtienen con compuestos que tienen grandes diferencias entre las 2 longitudes de onda de excitación y de emisión.
Sólo ciertassustancias poseen la propiedad de ser fluorescentes: son los fluorocromos (fluoróforos). Compuestos que no son en sí mismo fluorescentes, sólo débilmente pueden convertirse en derivados muy fluorescentes mediante reacciones químicas como condensaciones, sustituciones, deshidrataciones u oxidaciones, o simplemente modificando su pH particular.
La fluorescencia es emitida por los compuestos en todasdirecciones, pero sólo se mide una pequeña parte que llega al detector.
El tiempo transcurrido entre la absorción de la radiación electromagnética y la emisión de la fluorescencia es muy pequeño, del orden de 10-8 segundos (10-8 - 10-4) (es más lento el fenómeno de fluorescencia que el de absorción ya que la absorción se produce en 10-15 seg)
La fluorescencia emitida puede cuantificarse; la luzfluorescente se puede utilizar para cuantificar la cantidad de compuesto fluorescente que la emite. Se puede aplicar al fenómeno de fluorescencia la Ley de Beer, siempre que se trabaje con soluciones diluidas: según ella, la intensidad de la radiación fluorescente es proporcional a la concentración de la sustancia en solución (esta relación es sólo válida para soluciones diluidas donde la absorbancia...