Escalas Brix y Beaumé

Grado en Ciencia y Tecnología de los Alimentos
Asignatura: Biología

INFORME PRÁCTICA Nº 1: DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES. MÉTODO DE SOMOGYI-NELSON.

Introducción

La determinación de los azúcares reductores mediante el método de Somogyi-Nelson se basa en encontrar azúcares que sean capaces de reducir los agentes oxidantes. Estos azúcares están formados por ungrupo reductor, como el aldehído o el grupo cetona libre. A su vez, los agentes oxidantes oxidan a los azúcares reductores. En este caso, los agentes oxidantes que se reducen son: el ión férrico, que pasa a ión ferroso; y el ión cúprico, que pasa a ión cuproso.

Con el método de Somogyi-Nelson se puede determinar de manera cuantitativa los azúcares reductores que son capaces de reducir losagentes oxidantes anteriormente descritos mediante un espectrofotómetro, que consiste en transmitir luz para determinar la concentración de soluto que se encuentra en una disolución.

Materiales y reactivos

12 tubos de ensayo con tapa roscada
Pipeta automática
Vaso de precipitados
Agitador de tubos o vórtex
Incubadora
Espectrofotómetro
Reactivo de Somogyi I
Reactivo de Somogyi IIGlucosa de 500 ppm (Sol. A)
Reactivo de Nelson
Agua destilada

Métodos

En primer lugar, se preparan seis tubos de ensayo con agua destilada y glucosa de 500 ppm según la siguiente tabla:

Sol. A (ml) Agua destilada (ml) Glucosa (µg/ml)
0 2 0
0,1 1,9 5
0,2 1,8 10
0,3 1,7 15
0,4 1,6 20
0,5 1,5 25

Seguidamente, se realiza el reactivo de Somogyi mediante 24 ml de reactivo de Somogyi I y6 ml de reactivo de Somogyi II, ya que:

V.Total = 30 ml

Si en 5 ml de mezcla hay 4 ml de reactivo de Somogyi I, por regla de tres en 30 ml de mezcla habrá 24 ml de reactivo de Somogyi I y, por tanto, 6 ml de reactivo de Somogyi II.

5 ml  4 ml S.I
30 ml  x ml S.I

x= (30•4) / 5 = 24 ml de Somogyi I  30 ml V. Total – 24 ml Somogyi I = 6 ml de Somogyi II

Así, se rellenan otrosseis tubos de ensayo con 2 ml de muestras problema (P1 en dos tubos de ensayo, P2 en otros dos y P3 en otros dos) y 2 ml del reactivo de Somogyi resultante en cada tubo de ensayo.

A continuación, se tapan todos los tubos con su tapa correspondiente y se agita cada uno mediante la utilización del vórtex. Después se calientan los tubos en la incubadora durante 15 minutos con agua hirviendo a 100ºC.Cuando transcurren estos 15 minutos, se enfrían los tubos bajo el grifo y se espera hasta que baje la temperatura.

En cuanto los tubos de ensayo se han enfriado, se les echa 2 ml de reactivo de Nelson y 4 ml de agua destilada en cada uno, se mezclan en el vórtex y seguidamente, evaluar la absorbancia de cada muestra utilizando el espectrofotómetro a una longitud de onda de 540 nm. Antes debuscar la absorbancia de todas las muestras se coloca en una cubeta 1 ml de agua destilada para tenerlo como patrón. Cuando se meten las cubetas con las muestras hay que tener cuidado ya que el espectrofotómetro no da las medidas exactas si no se quitan las burbujas de las cubetas. Los resultados medidos en el espectrofotómetro de los seis primeros tubos de ensayo están dados en la siguiente curvapatrón:

Concentración de glucosa Absorbancia
0 0
5 0,1711
10 0,4591
15 0,7119
20 1,0107
25 1,2626








En esta tabla aparecen los datos medidos en el
espectrofotómetro a partir de los primeros seis
tubos de ensayo citados.

A partir de la curva patrón sepuede hacer una recta donde se muestra la relación entre la concentración de la glucosa y la absorbancia obtenida mediante el espectrofotómetro.

Esta es la recta que da la relación entre la concentración de la glucosa en µg/ml (eje x) y la absorbancia obtenida en nm. La ecuación de la recta, lógicamente, da la relación de la concentración de la glucosa y la absorbancia.

Con...