Espectofotometria

ESPECTROFOTOMETRÍA.
La espectrofotometría está referida a los métodos, cuantitativos, de análisis químico que utilizan la luz para poder medir la concentración de las sustancias químicas. Son conocidos como métodos espectrofotométricos y según sea la radiación utilizada como espectrofotometría de absorción visible (colorimetría), infrarroja, ultravioleta.

MÉTODOS ESPECTRO ANALITICOSUn método analítico, depende de la calidad de los instrumentos utilizados para observarlo y del sistema químico observado.
La cantidad de ruido que se encuentra presente en un sistema instrumental y/o químico determina la concentración de analito más pequeña que puede medirse con exactitud, y fija también la precisión de la medida a concentraciones más grandes. Conforme las concentracionesdisminuyen hacia el nivel de traza o las fuentes de señales se tornan débiles, el problema de distinguir las señales respecto al ruido se hace cada vez más difícil, ocasionando una disminución en la exactitud y la precisión de las medidas. La capacidad de un sistema instrumental para discriminar entre señales y ruido se expresa, usualmente como la relación señal-ruido.

Fotometría.
Dentro de losmétodos colorimétricos, hay un gran número de determinaciones que se realizan comúnmente en el laboratorio, utiliza medidas de energía radiante, ya sea absorbida, emitida o reflejada. Estas medidas se determinan a través de técnicas fotométricas. Las técnicas fotométricas tienen su fundamento en las interacciones de las radiaciones electromagnéticas sobre la materia.

Radiaciones Electromagnéticas  Pueden considerarse como un conjunto de corpúsculos, que son llamados fotones, los cuales siempre llevan asociada una onda. La energía de radiación está relacionada con la longitud de onda. Las longitudes de onda más cortas poseen mayor energía que las longitudes de onda más largas. De tal manera que podemos hablar de un espectro electromagnético constituido por las radiacioneselectromagnéticas, mismo que se ha dividido en varias regiones, de acuerdo con la longitud de onda (λ) y la energía.

1. Ultravioleta (100-390 nm)
2. Infrarrojo (700-100 000 nm)
3. Rayos X (1-100 nm)
4. Microondas (100 000- 1 000 000 nm)
5. Visible (390-700 nm)

MÉTODO ESPECTROFOTOMETRICO
Un método espectrofotométrico para que sea cuantitativo son:
-Que tenga alta precisión yexactitud.
-Que el método sea selectivo al analito que se desea analizar.
-Que esté libre de interferencias que afecten el resultado analítico ó que las interferencias se puedan controlar.
-Que tenga una alta sensibilidad.
-Que el límite de detección corresponda a una concentración baja.

Para el establecimiento de un método espectrofotométrico correcto, después de optimizar las condicionesquímicas del sistema (temperatura, pH, control de interferentes, solvente apropiado, concentración adecuada de reactivos, protección a la luz para evitar reacciones fotoquímicas, etc.) que garanticen que se tiene la especie de interés en condiciones adecuadas para la medida, se establecen los siguientes parámetros:

1- Intervalo óptimo de concentraciones: Es recomendable trabajar conconcentraciones que permitan que se cumpla la ley de Beer, con el fin de obtener una curva de calibración que tenga una relación lineal.

2- Longitud de onda analítica: Es elegida por el registro y/o la observación de la curva espectral o espectro de la sustancia que indicará si es adecuado tomar la longitud de onda de máxima absorción u otra banda característica de la sustancia como longitud de onda pararealizar las medidas, la longitud de onda escogida se conoce como longitud de onda analítica.

Para obtener el intervalo óptimo de concentraciones primero se construye la curva de Ringbom, que consiste en construir una gráfica de absortancia (100- %T) vs. lg Concentración. Los datos se obtienen preparando una serie de soluciones patrón del analito, que cubran una variación de por lo menos dos...