Espectofotometria
Páginas: 5 (1012 palabras)
Publicado: 26 de mayo de 2012
UNIVERSIDAD CIENTIFICA DEL SUR
FACULTAD: Medicina Veterinaria y Zootecnia.
CURSO: Bioquímica
PROFESORA: Elena Benavides.
PRÁCTICA 1º
TÍTULO: Espectrofotometría
INTEGRANTES:
Cokting, Santiago.
Vidal, Thais.
HORA: 10:00 – 12:00
FECHA: 7 de abril de 2012
Marco Teórico.-
La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas parala detección específica de moléculas. Se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomoléculas, etc.) y estado de agregación (sólido, líquido, gas). Los fundamentos físico-químicos de la espectrofotometría son relativamente sencillos.
Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energía interna.Esto permite que se inicien ciclos vitales de muchos organismos, entre ellos el de la fotosíntesis en plantas y bacterias.
El análisis espectrofotométrico, constituye una serie de métodos de análisis cuantitativos que utilizan la medición de la intensidad de la luz transmitida a través de soluciones que tienen la propiedad de absorber una determinada longitud de onda.
El paso de un haz deluz de una longitud de onda determinada a través de una solución, es reflejada en parte, mientras que la mayor fracción de esta, es absorbida por la sustancia disuelta. La absorción es proporcional a la concentración del soluto.
La propiedad de una sustancia para absorber una determinada longitud de onda es dependiente de su estructura química. La ley de Lambert y Beer expresa las relacionesantes mencionadas mediante la siguiente ecuación:
Log Io/It = . l . c
Io = Luz incidente It = Luz transmitida
= Coeficiente de extinción c = concentración de la solución
l = Distancia recorrida por la luz a través de la solución.
El log Io/It también se conoce como densidad óptica (D.O.) de la solución y es directamente proporcional a la concentración del soluto. Para determinar laconcentración de una sustancia puede hacerse uso del factor de calibración o de una curva de absorción.
La preparación de una curva de calibración se realiza utilizando concentraciones conocidas de la sustancia cuya concentración deseamos conocer. Luego se determina la densidad óptica de cada una de dichas concentraciones y se procede a preparar un grafico, donde, en el eje de abscisas sedisponen las concentraciones de la sustancia y en el eje de ordenadas la densidad óptica.
Factor de calibración.-
Se define como la relación que existe entre la concentración del estándar y su densidad óptica. Este factor puede obtenerse de la manera siguiente:
Factor de calibración = Concentración del estándar /Densidad óptica
La concentración del estándar puede expresarse como: mg/dL,g/dL, mEq/L,U/L, etc.
Objetivos.-
✓ Conocer y aplicar los fundamentos de la espectrofotometría para la determinación de concentraciones en soluciones.
✓ Conocer los fundamentos de la espectrofotometría y las variables involucradas en la ley de Lambert-Beer-Bourger.
✓ Determinar la concentración [] de una muestra problema.
✓ Seleccionar la longitud de onda apropiada paralas mediciones de absorbancia
Materiales y Métodos.-
✓ Espectrofotómetro
✓ Agua destilada
✓ Tubos de ensayo
✓ Micropipetas
✓ Colorante Azul de Metileno (10 mg/dL)
Experimento Nº 1.- Preparación de una curva de Absorción.-
Para elaborar una curva de absorción se preparara el siguiente sistema:Solución de azul de metileno (10 mg/dL) 1 mL. Agua destilada 4 mL Luego se procederá a realizar lecturas en el espectrofotómetro a las siguientes longitudes de onda: 560, 580, 600, 620, 640, 660, 680 y 700 nm.
Graficar utilizando papel milimetrado las densidades ópticas en función de las longitudes de onda y determinar el pico de máxima absorción del azul de metileno, el cual corresponde al...
FACULTAD: Medicina Veterinaria y Zootecnia.
CURSO: Bioquímica
PROFESORA: Elena Benavides.
PRÁCTICA 1º
TÍTULO: Espectrofotometría
INTEGRANTES:
Cokting, Santiago.
Vidal, Thais.
HORA: 10:00 – 12:00
FECHA: 7 de abril de 2012
Marco Teórico.-
La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas parala detección específica de moléculas. Se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomoléculas, etc.) y estado de agregación (sólido, líquido, gas). Los fundamentos físico-químicos de la espectrofotometría son relativamente sencillos.
Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energía interna.Esto permite que se inicien ciclos vitales de muchos organismos, entre ellos el de la fotosíntesis en plantas y bacterias.
El análisis espectrofotométrico, constituye una serie de métodos de análisis cuantitativos que utilizan la medición de la intensidad de la luz transmitida a través de soluciones que tienen la propiedad de absorber una determinada longitud de onda.
El paso de un haz deluz de una longitud de onda determinada a través de una solución, es reflejada en parte, mientras que la mayor fracción de esta, es absorbida por la sustancia disuelta. La absorción es proporcional a la concentración del soluto.
La propiedad de una sustancia para absorber una determinada longitud de onda es dependiente de su estructura química. La ley de Lambert y Beer expresa las relacionesantes mencionadas mediante la siguiente ecuación:
Log Io/It = . l . c
Io = Luz incidente It = Luz transmitida
= Coeficiente de extinción c = concentración de la solución
l = Distancia recorrida por la luz a través de la solución.
El log Io/It también se conoce como densidad óptica (D.O.) de la solución y es directamente proporcional a la concentración del soluto. Para determinar laconcentración de una sustancia puede hacerse uso del factor de calibración o de una curva de absorción.
La preparación de una curva de calibración se realiza utilizando concentraciones conocidas de la sustancia cuya concentración deseamos conocer. Luego se determina la densidad óptica de cada una de dichas concentraciones y se procede a preparar un grafico, donde, en el eje de abscisas sedisponen las concentraciones de la sustancia y en el eje de ordenadas la densidad óptica.
Factor de calibración.-
Se define como la relación que existe entre la concentración del estándar y su densidad óptica. Este factor puede obtenerse de la manera siguiente:
Factor de calibración = Concentración del estándar /Densidad óptica
La concentración del estándar puede expresarse como: mg/dL,g/dL, mEq/L,U/L, etc.
Objetivos.-
✓ Conocer y aplicar los fundamentos de la espectrofotometría para la determinación de concentraciones en soluciones.
✓ Conocer los fundamentos de la espectrofotometría y las variables involucradas en la ley de Lambert-Beer-Bourger.
✓ Determinar la concentración [] de una muestra problema.
✓ Seleccionar la longitud de onda apropiada paralas mediciones de absorbancia
Materiales y Métodos.-
✓ Espectrofotómetro
✓ Agua destilada
✓ Tubos de ensayo
✓ Micropipetas
✓ Colorante Azul de Metileno (10 mg/dL)
Experimento Nº 1.- Preparación de una curva de Absorción.-
Para elaborar una curva de absorción se preparara el siguiente sistema:Solución de azul de metileno (10 mg/dL) 1 mL. Agua destilada 4 mL Luego se procederá a realizar lecturas en el espectrofotómetro a las siguientes longitudes de onda: 560, 580, 600, 620, 640, 660, 680 y 700 nm.
Graficar utilizando papel milimetrado las densidades ópticas en función de las longitudes de onda y determinar el pico de máxima absorción del azul de metileno, el cual corresponde al...
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