espectrofotometria molecular UV-Visible

ESPECTROFOTOMETRIA MOLECULAR ULTRAVIOLETA- VISIBLE

FUNDAMENTO DEL MÉTODO

La espectrofotometría es un método de análisis óptico, se basa en la interacción de las radiaciones electromagnéticas con las propiedades de la materia, para medir la absorción o emisión de la radiación electromagnética que pasa a través de la misma, enfunción de una longitud de onda específica, para la cuantificación e identificación de la naturaleza de una sustancia por medio del análisis de la radiación.
El color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca, que inciden sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbidas.
El disolvente para la espectroscopiaultravioleta - visible debe ser transparente a lo largo de toda esta región y debe disolver una cantidad suficiente de muestra para dar un pico definido. Además se debe prever las posibles interacciones con especies absorbentes.
La polaridad del disolvente con frecuencia influye en la posición de los máximos puntos de absorción. Por ejemplo: los disolventes polares, como el agua, alcoholes, esteres ycetonas, tienden a difuminar los espectros vibracionales y por consiguiente, no se debe usar cuando se desea un espectro detallado. Por lo tanto cuando se comparan espectros con fines de identificación, se debe emplear el mismo disolvente.
Las muestras para espectrofotometría UV-Vis suelen ser liquidas, aunque la absorbancia de los gases e incluso de los sólidos también pueden medirse. Lasmuestras suelen ser colocadas en una célula trasparente, conocida como cubeta que en algunos instrumentos se pude usar tubos de ensayo como cubetas.

PROPIEDADES

- Los compuesto con dobles enlaces aislados, triples enlaces, enlaces peptídicos, sistemas aromáticos, grupos carbonilos y otros heteroátomos tienen absorbancia en la región UV, por lo que esta es muy importante para la determinacióncuantitativa de compuestos orgánicos.
- La región UV tiene un rango de longitudes de onda entre 200 y 400nm.
- Diversos factores como pH, concentración de sal y el disolvente utilizado altera las cargas de las moléculas, provocando desplazamientos en el espectro UV.

PARÁMETROS DE MEDIDA
La ley de Beer establece que la absorbancia de una solución es directamente proporcional a la concentraciónde la solución. Por tanto, la espectrometría UV/VIS puede usarse para determinar la concentración de una solución.
Se mide la intensidad de la luz que pasa a través de la muestra (I), se compara con la intensidad de la luz antes de pasar atraves de la muestra (Io), ésta debe medirse retirando la muestra. La relación I/Io se llama transmitancia y se expresa: %T. La absorbancia (A) se basa en latransmitacion:

A= - log (%T) Ley de Beer


REGIÓN DE APLICACIÓN
- Se utiliza para identificar algunos grupos funcionales de moléculas y para determinar el contenido y fuerza de una sustancia.
- Se utiliza de manera general en la determinación cuantitativa de los componentes de soluciones de iones de metales de transición y compuestosorgánicos altamente conjugados.
- Se utiliza extensivamente en laboratorios de química y bioquímica para determinar pequeñas cantidades de cierta sustancia, como las trazas de metales en aleaciones o la concentración de cierto medicamento que puede llegar a ciertas partes del cuerpo.





INTERFERENCIAS

- El agua no interactúa con la radiación incidente, por lo que es excelente enesta técnica, pero no es un disolvente satisfactorio para compuestos orgánicos.



LIMITACIONES

Existen limitaciones de la Ley de Beer ya que se han encontrado desviaciones frecuentes entre la absorbancia medida y la concentración. Algunas de estas desviaciones son llamadas:
- Desviaciones reales: representan limitaciones propias de la ley. A concentraciones altas, el grado de las...