Espectrofotometria para la determinación de vitamina a en alimentos

RECOPILADO POR:
EL PROGRAMA UNIVERSITARIO DE ALIMENTOS

NMX-F-234-1972. MÉTODO DE PRUEBA PARA LA DETERMINACIÓN DE
VITAMINA “A” EN LECHE. NORMAS MEXICANAS. DIRECCIÓN GENERAL DE
NORMAS.
1. ALCANCE.
Esta Norma tiene por objeto establecer el método de prueba para la determinación de
Vitamina “A” en leches.
2. MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO.
2.1 Aparatos y equipo.
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Balanza granataria con sensibilidad de 0.1 g.
Balanza analítica con sensibilidad de 0.0001 g.
Espectrofotómetro con celdas apropiadas.
Mortero de porcelana.
Centrífugas hasta 3000 r.p.m.
Aparato agitador mecánico.
Estufa con regulador de temperatura.
Matraz Erlenmeyer de 250 ml con tapón bihoradado.
Matraces aforados de boca esmerilada de 25 ml y 50 ml.
Vaso de precipitadode 250 ml.
Matraz de boca esmerilada de 50 ml (ver 2.6.1.3).
Tubos de centrífuga (1 cm de diámetro y 12 ml de volumen, de boca esmerilada).
Pipetas de 2 y 5 ml (precisión normal) graduadas hasta la punta.
Jeringas de tuberculina.
Material común de laboratorio.

2.2 Materiales y Reactivos.
Los reactivos que a continuación se mencionan deben ser grado analítico, a menos que se
indique otracosa y cuando se hable de agua, ésta debe ser destilada y recién hervida.
Vitamina "A" grado farmacéutico. Cuando no se disponga de vitamina "A" con título
conocido, éste se puede determinar por vía espectrométrica.
Solución de hidróxido potásico en alcohol. Se pesan 61.7 g de KOH y se colocan en un
matraz volumétrico de 100 ml y se afora al volumen con agua. Se disuelve bien y de estasolución se toma un ml; se le agregan 10 ml de alcohol etílico, y se filtra.
Eter de Petróleo recién destilado y con punto de ebullición de 40-60°C

Cloroformo purísimo. Se emplea el disolvente deshidratado con sulfato sódico anhidro.
Cerca de 500 ml de este disolvente más una pequeña cantidad de carbón activado se agitan
en un frasco en el agitador mecánico durante 30 minutos; después se filtra yse destila; se
introduce en la tubuladora del matraz recolector un tubo con cloruro de calcio, para evitar la
penetración de humedad.
1.3 dicloro-2 propanol. (GDH) activado para la determinación de la vitamina A, destilándolo
con tricloruro de antimonio bajo presión reducida de 40 mm de mercurio.
2.3 Toma de la Muestra
Se toma una muestra representativa del lote de prueba, de acuerdo con laNorma Mexicana
de muestreo NMX-R-017 en vigor.
2.4 Procedimiento o Determinación
2.4.1 Saponificación.
Se pesan con exactitud 10 g de la muestra, en un vaso, y se disuelven con 20 ml de agua a
40-50°C; luego se traspasa cuantitativamente a un matraz volumétrico de 50 ml; se enfría a
20°C y se afora a la marca con agua.
En caso de productos con más de 2500 U.I. por g, se pesan 5 g y se aforaa 100 ml con agua
y se mezcla completamente. Se toman con pipeta 2 ml de esta solución (agitando bien en el
momento preciso de cada toma) en cada uno de 4 tubos de centrífuga.
Se agrega a cada tubo 2 ml de la solución alcohólica de KOH; se reemplaza el aire de los
tubos por nitrógeno, se tapan y se agitan ligeramente.
Se saponifican durante 35 minutos, colocando los tubos en Baño María a60°C.
2.4.2 Extracción.
2.4.2.1 Primera extracción.- Se colocan en cada tubo 2 ml de éter de petróleo y se agitan
durante 10 minutos en el agitador mecánico, luego se centrifugan por 2 minutos. A
2000 r.p.m. se extrae la parte superior (éter de petróleo más vitamina A) con la
jeringa de tuberculina y se recoge la porción de cada tubo en el matraz esmerilado de
50 ml separadamente.
2.4.2.2Segunda extracción.- Se colocan 2 ml de éter de petróleo en cada tubo y se agitan
durante 10 minutos; se separa la parte superior y se agrega a la primera extracción,
correspondiente a cada tubo.

2.4.2.3 Tercera Extracción.- Se coloca un ml de éter de petróleo en cada tubo y se agitan
durante 5 minutos, luego se centrifuga por 2 minutos y se separa como se indicó
anteriormente.
Por...