Espectrofotometria

Universidad Nacional Experimental

“Simón Rodríguez”

Núcleo Canoabo

Ingeniería de los Alimentos

Bioquímica I

Practica N ° 3 y 4

Quintero Marvin 19.525.469
Canoabo; 2009.

La Espectrofotometría

La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la detección específica de moléculas. Se caracteriza por su precisión, sensibilidad y suaplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomoleculas, etc.) y estado de agregación (sólido, líquido, gas). Los fundamentos físico-químicos de la espectrofotometría son relativamente sencillos.

Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energía interna. Esto permite que se inicien ciclos vitales de muchos organismos, entre ellos el dela fotosíntesis en plantas y bacterias.

En esta práctica estudia la absorción de luz en el ultravioleta cercano (325-420nm) y en el visible (420-900nm). Cuando una molécula absorbe un fotón en este intervalo espectral, se excita pasando un electrón de un orbital del estado fundamental a un orbital excitado de energía superior.

Como la energía se conserva, la diferencia de energía entreel estado fundamental de la molécula (A) y su esta do excitado (A*) debe ser exactamente igual a la energía del fotón. Es decir, una molécula sólo puede absorber fotones cuya energía h. v sea igual a la energía de un estado molecular excitado. Cada molécula tiene una serie de estados.

En este proceso, los colorantes y productos químicos se combinan con una solución que contienen dióxidode azufre. El color de la solución da lugar a diferentes cantidades de luz absorbida. La cantidad de luz absorbida, medida con un espectrofotómetro, indica la cantidad de dióxido de azufre.

Finalidades de la Espectrofotometría

La espectrofotometría visible consiste, entonces, en una técnica que se basa en la capacidad para absorber una serie de moléculas para determinadas radiaciones.Por otra parte, el principio básico de la espectroscopia ultravioleta-visible, un grado más específico, se relaciona con la absorción de la radiación ultravioleta, que es visible por una molécula, lo que provoca la promoción de un electrón de un estado basal a uno excitado. En cuanto a la finalidad de este proceso, también es posible destacar muchos objetivos que cumple: los estudios cuantitativosy cualitativos de las soluciones que se desconocen en un laboratorio de investigación; también se la emplea para la estandarización de los colores de materiales bien diversos, como el caso de los plásticos y de las pinturas; permite que se detecten absolutamente todos los niveles de contaminación del aire y del agua.
Y como si todo lo mencionado fuera poco, la espectrofotometría también sirvede gran ayuda en la determinación de todas las trazas de impurezas que normalmente pueden aparecer en los reactivos y también en los alimentos.
Espectros de Absorción
Son los espectros resultantes de intercalar una determinada sustancia entre una fuente de luz y un prisma

- Los Espectros De Absorción Continuos: se obtienen al intercalar el sólido entre el foco de radiación y el prisma. Así,por ejemplo, si intercalamos un vidrio de color azul quedan absorbidas todas las radiaciones menos el azul.

- Los Espectros De Absorción Discontinuos: se producen al intercalar vapor o gas entre la fuente de radiación y el prisma. Se observan bandas o rayas situadas a la misma longitud de onda que los espectros de emisión de esos vapores o gases.

Obtención de un Espectro de Absorción

Elespectro de absorción es una representación gráfica que indica cantidad de luz absorbida (ε) a diferentes valores de λ.

A partir de una solución diluida de un compuesto, cuya absorbancia máxima entra dentro del rango de medida del espectrofotómetro, se verá el valor de absorbancia a diferentes longitudes de onda frente a un blanco que contenga el disolvente de la solución de la muestra a...