espectrofotometria

1.3.2. TURBIDIMETRÍA
La turbidimetría es un campo analítico relacionado con la colorimetría, tanto en el aspecto teórico como experimental. La turbidimetría determina la cantidad de luz no dispersada, el fundamento de esta técnica es la dispersión de la luz por partículas no transparentes suspendidas en un líquido, como por ejemplo, precipitado y suspensiones coloidales.
Cuando se utiliza estatécnica con fines cualitativos se suelen construir curvas de calibrado con muestras de concentraciones conocida. Estas muestras (precipitados o suspensiones) deben prepararse bajo condiciones rigurosamente controladas ya que la cantidad de luz dispersada depende no solo de la concentración sino también del tamaño y número de partículas implicadas. Para que la luz dispersada pueda utilizarsecomparativamente es necesario que tanto el número de partículas como su tamaño sean del mismo orden. Además, la longitud de onda de luz que es dispersada más eficazmente depende también del tamaño de las partículas. Bajo condiciones controladas, se puede lograr que el tamaño de partícula en la suspensión sea reproducible y en consecuencia que esta técnica sea de aplicación analítica.
Las aplicacionesde la turbidimetría son muy variadas, algunos sistemas son turbios al llegar al laboratorio analítico, como en el análisis de los materiales de suspensión en las aguas. En la industria se utiliza en la medición de la transparencia de bebidas y productos farmacéuticos.

MERINO, 1996. MANUAL TEÓRICO PRÁCTICO DE INSTRUMENTACIÓN ANALÍTICA. TESIS DE LICENCIATURA. PAG. 19

1
TEMA 3: Métodospara el análisis de proteínas

3.1. Cuantificación de proteínas totales.
3.2. Técnicas de separación de proteínas. Análisis de proteínas específicas.

INTRODUCCIÓN

A lo largo de este tema vamos a estudiar las distintas técnicas que nos
permiten analizar desde un punto de vista cuali y cuantitativo, el contenido
proteico de las muestras biológicas haciendo especial hincapié en elestudio
de las proteínas plasmáticas.
Las proteínas están presentes en todas las células y en los distintos líquidos
corporales: suero o plasma (66-83g/L), orina (100-200 mg/L), líquido
cefalorraquídeo (15-45 mg/dL).
Si nos centramos en las proteínas plasmáticas, podemos diferenciar:
· Proteínas plasma-específicas: componentes habituales del plasma.
· Proteínas noplasma-específicas: aquellas que aparecen en el plasma
por rotura de otras células.

Las proteínas plasma-específicas (albúmina + globulinas) se sintetizan
fundamentalmente en el hígado, pero también en: células plasmáticas,
ganglios linfáticos, bazo y médula ósea.

En caso de enfermedad, tanto la concentración total como la de las distintas
fracciones pueden verse alteradas. Así, ladeterminación de las proteínas
totales sirve para el diagnóstico de:
· Afecciones hepáticas
· Afecciones de la médula ósea
· Otras afecciones del metabolismo o nutricionales

3.1. Cuantificación de proteínas totales

Los principales métodos empleados para la determinación de proteínas
totales son los siguientes:

· Método del Biuret
En solución alcalina el Cu+2
reacciona con elenlace peptídico de las
proteínas dando un color purpúreo que se cuantifica
espectrofotométricamente (540nm). Como estándar se utiliza una solución
de albúmina.

Proteína + Cu+2
Complejo Cu-Proteína (púrpura)

Muestra: suero o plasma (heparina o EDTA). Separar el suero del coágulo o
el plasma de las células antes de 3h. Si el paciente está acostado durante la
extracción elresultado será menor.

· Método de Lowry
Dependen de la concentración de tirosina y triptófano de la muestra.
Consiste en dos reacciones:
1. Reacción de Biuret 2
2. Reacción de Folin: característica de los grupos –OH reductores de los
aminoácidos tirosina y triptófano que, junto con los complejos Cu+2
,
reducen el reactivo de Folin generando un color azul.
Está sujeto a...