Espectrofotometria

T rabaj o s P rác ti co s de Quím ic a A n alí t i c a C u an ti ta ti va

Química Analítica
Instrumental
Guía de Técnicas seleccionadas

Espectrofotometría
Potenciometría
Fotometría de llama
Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC)

Bioq. Patricia Tierra
Jefe de trabajos Prácticos

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Escuela Técnica Nº1 “Ing. Otto Krause”

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Espectrofotómetro para visible y ultravioleta
La mayoría de los instrumentos se hallan preparados para trabajar indistintamente en
ambas regiones, esto se debe a que el mecanismo de absorción es el mismo para las dos regiones
citadas.
La radiación visible y ultravioleta excita a los electrones mas exteriores de los átomos y
moléculas. Esta excitación puede serprovocada por un choque electrónico, por absorción de
radiación de la frecuencia apropiada o, por temperaturas elevadas.
La longitud de onda de la radiación absorbida es inversamente proporcional a la energía de
excitación. Los grupos mas fácilmente activados absorben a longitud de onda mayores. Las
configuraciones moleculares que poseen la propiedad de absorber radiación son coloreadas en laluz visible o aparecerían coloreadas en la luz ultravioleta si el ojo humano fuera sensible a esta
radiación. Tales grupos de átomos reciben el nombre de cromóforos. En los compuestos orgánicos,
la absorción esta relacionada frecuentemente con los dobles enlaces entre átomos de carbono,
nitrógeno oxigeno o azufre.
Análisis cuantitativo en la región ultravioleta: El principal inconveniente quese presenta es
la elección del disolvente. Debe cumplir con dos condiciones: ser disolvente de la muestra y ser
además transparente en la región espectral usada. El agua es generalmente excelente para esta
última condición pero no es buen disolvente para los compuestos orgánicos
PARTE PRÁCTICA:
Fundamento teórico: La absorción de radiación electromagnética por parte de una solución puede
serempleada para la determinación de la concentración de la misma. Este fenómeno es
interpretado por la Ley de Lambert y Beer que relaciona la intensidad de la radiación
electromagnética que incide sobre la solución y la intensidad transmitida
A = log Io = a.b.c
I
como: T = I por lo tanto
Io
donde:

A = log 1 = -log T
T

A = absorbancia de la solución
Io = intensidad de la radiaciónincidente
I = intensidad de la radiación transmitida
a = absortividad molar o coeficiente molar de extinción
b = espesor del medio absorbente en centímetros
c = concentración de la solución (mol/litro)
T = transmitancia de la solución (por ciento)
Este método es utilizado para determinar la concentración de una sustancia cuya solución es
coloreada o bien adquiere color por reacción frente a unreactivo específico.

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Escuela Técnica Nº1 “Ing. Otto Krause”

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Equipo empleado: Espectrofotómetro Espectronic 20
Con este modelo se puede trabajar en un intervalo de longitudes de onda de 380-625 nm.
Operación:
1) Encender el equipo con la perilla 2 y dejar que se estabilice por 5’.
2) Seleccionar lalongitud de onda al valor deseado con la perilla 1.
3) Ajuste del 0%T: Con la perilla 2 llevar a 0% de T , con el portatubo vacío y cubierto.
4) Ajuste del 100%T: Con la perilla 3 y colocando en el portatubo el tubo con solución de
referencia o blanco, lleno hasta la mitad y haciendo coincidir la marca del tubo con la del portatubo.
Tapar.
En adelante no modificar los ajustes.
5) Retirar el tubocon el blanco y colocar la muestra incógnita o los testigos y leer la %T o A, de la
misma forma; tubo lleno hasta la mitad y haciendo coincidir las marcas del tubo y portatubo.

Parte Práctica: Determinación de hierro
Fundamento del método: Los iones férricos en presencia de los iones tiocianato dan lugar a la
formación de comlejos intensamente coloreados de rojo de acuerdo a la siguiente...